(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111204735.2 (22)申请日 2021.10.15 (71)申请人 南京中医药大学 地址 210023 江苏省南京市栖霞区仙林大 道138号 (72)发明人 狄留庆　王若宁　赵华聪　王雪　 (74)专利代理 机构 南京中律知识产权代理事务 所(普通合伙) 32341 代理人 沈振涛 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/64(2017.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 45/06(2006.01)A61P 25/28(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ” 融合纳米粒及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种靶向肽修饰的中药多组 分“外泌体样 ”融合纳米粒的制备方法和应用， 所 述纳米粒主要是由功能化脂质体和外泌体融合 而成， 所述功能化脂质体主要由靶向肽、 磷脂和 中药脂溶性活性药物构成， 所述外泌体负载有中 药水溶性活性药物。 融合纳米粒的制备方法包括 聚乙二醇诱导法、 反复冻融法、 挤出法、 超声破碎 法和孵育法。 本发明制备工艺简单、 条件温和、 成 本低廉， 制得的纳米粒具有载药种类多样、 高穿 透性、 生物靶向调控、 治疗机制互补、 生物 安全性 等多种优点。 该纳米药物递送平台能够实现中药 多组分共递送、 联合给药 以及协同精准治疗， 能 够实现对于复杂的进行性疾病如肿瘤、 神经退行 性疾病等的协同靶向治疗， 具有良好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书10页 附图3页 CN 113908293 A 2022.01.11 CN 113908293 A 1.一种靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒， 其特征在于， 所述 “外泌体 样”融合纳米粒主要是 由功能化脂质体和外泌体融合而成， 所述功能化脂质体主要由靶向 肽、 磷脂和中药脂溶性活性药物构成， 所述外泌体负载有中药 水溶性活性药物。 2.根据权利要求1所述的靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒， 其特征在 于， 所述靶向肽选自归巢肽tLyp ‑1、 RGD、 iRGD、 angiopep ‑2中的一种或几种； 所述磷脂选自 DOPC、 DOPS、 DOPE、 DMPC、 DMPE中的一种或几种； 所述外泌体选自血液来源、 细胞来源、 尿液来 源外泌体中的一种或几种。 3.根据权利要求1所述的靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒， 其特征在 于， 所述中药脂溶性活性药物选自丹参酮类、 雷公藤类、 黄连类药物中的一种或几种； 所述 中药水溶性活性药物选自丹参 酚酸类、 人参皂苷类、 多糖 类药物中的一种或几种。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备 方法， 其特征在于， 包括以靶向肽、 磷脂和中药脂溶性活性药物为原料， 制备靶向肽修饰的 脂质体； 将外泌体负载中药水溶性活性药物， 然后与所述靶向肽修饰的脂质体进 行融合， 即 得。 5.根据权利要求4所述的靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备方 法， 其特征在于， 包括如下步骤： (1)制备靶向肽、 磷脂、 中药脂溶性活性药物的有机溶 液A， 磷酸盐缓冲溶 液B； (2)将溶液A滴加入溶液B中， 乳化， 结束后， 旋蒸除去有机溶剂， 超声破碎， 得载药功能 化脂质体； (3)提取分离获得外泌体； (4)取步骤(3)所得外泌体， 加入中药水溶性活性药物和电穿孔介质溶液， 进行电击， 电 击结束后， 孵 育， 得载药外泌体； (5)取步骤(2)所得载药功能化脂质体和步骤(4)所得载药外泌体混合， 聚乙二醇诱导、 超声破碎、 反复冻融、 挤出或孵 育； (6)过膜除去游离药物， 即得。 6.根据权利要求5所述靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 当固体质量为mg时， 液体质量以mL计， 所述靶向肽1～2份， 磷脂3～ 7份， 中药脂溶性活性药物1份。 7.根据权利要求5所述靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 乳化时间为3 0～40min， 超声破碎时间为5～15mi n。 8.根据权利要求5所述靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 采用碘克沙 醇密度梯度离心法和超速离心法相结合的方式提取分 离得到外泌体； 步骤(4)中， 外泌体与中药 水溶性活性药物的质量比为5:(2 ‑5)。 9.根据权利要求5所述靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒的制备方法， 其特征在于， 步骤(5)中， 脂质体以磷脂总量计， 外泌体以蛋白含量计， 所述载药功能化脂质 体和载药外泌体质量比为1： (1 ‑4)， 所述超声破碎时间为5 ‑10min。 10.权利要求1 ‑3任一项所述的靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒在制 备抗肿瘤或治疗神经 退行性疾病药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113908293 A 2一种靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体样 ”融合纳米粒 及其制 备方法和应用 技术领域 [0001]本发明属于纳米制剂技术领域， 具体涉及一种靶向肽修饰的中药多组分 “外泌体 样”融合纳米粒及其制备 方法和应用法。 背景技术 [0002]外泌体是一种内源性、 直径在40 ‑100nm的胞外囊泡， 各种类型的细胞均可分泌外 泌体， 其普遍存在于体液中， 包括血液、 尿液、 唾液、 脑脊液等。 外泌体含有与细胞来源相关 的蛋白质 、 RNA， 可以运输蛋白和核酸， 参与细胞间通讯， 可用于疾病的诊断、 监测以及药物 疗效的筛选。 此外， 外泌体向病变细胞递送活性物质方面的特性推动其作为治疗载体的研 究。 外泌体膜表面具有多种特征性跨膜蛋白， 如四跨膜蛋白超家族蛋白CD9、 CD81、 CD63， 肿 瘤易感基因TSG101， 脂筏标记蛋白flotillin等。 基于外泌体特征蛋白设计的递送系统能够 靶向组织病区并发挥疾病治疗作用。 外泌体具有良好的生物相容性， 能够逃脱机体吞噬， 且 可以透过生物屏障， 尤其是 血脑屏障(Bl ood brain barrier， BBB)。 [0003]脂质体是人工合成纳 米材料， 具有良好的生物降解性和相容性， 大小可调控性好、 药物密封性能优良、 易于修饰， 被广泛应用于纳米药物递送系统的设计。 脂质体作为药物载 体， 具有淋巴系统趋向性和 被动靶向性， 此外， 通过在脂质体的脂质双分子层上修饰抗体、 糖残基和受体配体等， 可以赋予其特异主动靶向性， 将药物输送到特定的组织器官、 细胞或 亚细胞器。 近年来， 多肽在制药领域的应用受到研究届的关注。 它们不仅具有生物活性， 还 擅长将货物运输到靶区， 其在靶向治疗中的应用具有巨大的前景。 RGD肽(arginine ‑ glycine ‑aspartic  acid)可以靶向整合素α5β 1， 介导细胞粘附； 促黄体生成素释放激素 GnRH(gona dotropin ‑releasing  hormone)可以选 择性地与七跨膜G蛋白偶联受体GnRH ‑R结 合； 血管内皮素2(angiopep ‑2)是一种19聚肽， 其与大脑内皮细胞上低密度脂蛋白受体相关 蛋白1结合后能够穿过BBB； t Lyp‑1肽可以与肿瘤细胞及血管表明具有高亲和力和特异 性的 神经毡蛋白受体1(neuropi lin‑1， NRP‑1)结合， 具有穿透肿瘤血 管和肿瘤间质的功能。 [0004]癌症是导致死亡的主要原因之一， 仅次于心脏和循环系统疾病引起的死亡。 目前 对于癌症的治疗主要采取手术、 放疗和化疗相结合， 但临床治疗效果不佳， 预后较差， 会导 致严重的副反应， 给患者的生活质量带来极大影响。 其中， 所用抗癌药物缺乏肿瘤细胞靶向 性， 从而不可避免地带来正常细胞毒性。 除此之外， 临床所用抗癌药物往往受限于水溶性 差、 口服生物利用度低下等问题。 常规化疗药物如吉西他滨、 紫杉醇、 阿霉素等不能选择性 地蓄积于肿瘤部位而分布于全身， 临床治疗效果 不佳。 [0005]中药治疗肿瘤相关疾病具有悠久 的历史， 肿瘤在中医病证中归属于 “症瘕积聚 ”， 《神农本草经》 中记载有 70多味治疗症瘕积聚的药物。 中药种类繁多， 资源丰富， 多种中药表 现出抗肿瘤活性。 中药在临床减轻患者放、 化疗的副作用， 提高患者的生活质量、 生存时间 等方面发挥出重要作用。 中药发挥药效依靠 “多成分”、“多靶点”及“整体调节 ”作用。 但多 数 中药活性成分存在溶解度低、 口服生物利用度低、 毒副作用等问题， 对于中枢性神经系统疾说　明　书 1/10 页 3 CN 113908293 A 3