(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111094081.2 (22)申请日 2021.09.17 (66)本国优先权数据 20201097 7716.2 2020.09.17 CN 202110933105.2 2021.08.12 CN (71)申请人 上海霖羲 致企业管理有限公司 地址 201304 上海市浦东 新区自由贸易试 验区临港新片区丽正路1628号4幢1-2 层 (72)发明人 宋利平　王素琴　 (74)专利代理 机构 上海弼兴律师事务所 31283 代理人 王卫彬　黄益澍 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 47/68(2017.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 38/21(2006.01) A61K 38/20(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 37/06(2006.01) A61P 35/02(2006.01) A61P 3/00(2006.01) A61P 5/00(2006.01) A61P 5/14(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 双特异性重组蛋白及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种双特异 性重组蛋白， 包括 第一功能结合片段、 第二功能结合片段和Fc区； 该双特异性重组蛋白靶向目的抗原的第一功能 结合片段包含抗原结合片段， 其中抗原结合片段 中CL结构域的C末 端或CH1结构域的C末端与具有 免疫调节和/或代谢调节和/或内分泌调节功能 的第二功能结合片段直接连接或通过接头序列 连接。 此外， 还公开了该双特异性重组蛋白在制 备治疗肿瘤、 自身免疫性疾病、 感染疾病、 败血 症、 移植物抗宿主病、 代谢紊乱、 内分泌紊乱药物 中的应用。 本发 明可显著提高双特异性重组蛋白 第二功能结合片段的目标靶向性， 定向调节作 用， 还能显著降低制备过程中生成的含有第二功 能结合片段的非目标蛋白靶向非目标脏器、 组 织、 细胞而引起的毒副作用。 权利要求书4页 说明书41页 序列表111页 附图13页 CN 114195901 A 2022.03.18 CN 114195901 A 1.一种双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述双特异性重组蛋白包括第一功能结合片 段、 第二功能结合片段和Fc区； 所述双特异性重组蛋白靶向目的抗原的第一功能结合片段 包含抗原结合片段， 其中抗原结合片段中CL结构域的C末端或CH1结构域的C末端与具有免 疫调节功能和/或具有代谢调节功能和/或具有内分泌调节功 能的第二功能结合片段直接 连接或通过接 头序列连接； 优选地， 所述抗原结合片段与所述第二功能结合片段的N端直接连接或通过接头序列 连接， 并且， 所述第二功能结合片段的C端直接连接或通过接 头序列连接Fc的N端。 2.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有 免疫调节功能的第 二 功能结合片段靶向免疫检查 点、 免疫检查 点配体或细胞因子受体。 3.如权利要求2所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有 免疫调节功能的第 二 功能结合片段靶向P D‑1或其配体、 CD47或其配 体、 CD24或其配 体、 干扰素受体、 白介素受体。 4.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有代谢调节功能的第 二 功能结合片段靶向代谢调节因子、 代谢调节因子受体。 5.如权利要求4所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有代谢调节功能的第 二 功能结合片段靶向胰岛素受体、 成纤维细胞生长因子受体。 6.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有内分泌调节功能的第 二功能结合片段靶向内分泌调节因子、 内分泌调节因子受体。 7.如权利要求6所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述具有内分泌调节功能的第 二功能结合片段靶向激素受体。 8.如权利要求1所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述抗原结合片段中可变区和 恒定区直接连接或通过接头序列连接； 或所述抗原结合片段与Fc区直接连接或通过接头序 列连接； 或同时使用上述两种方式连接 。 9.如权利 要求1或8所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述接头序列包含(GGGGS) n、 (GGGS)n、 (GGS)n、 (G)n、 (GS)n、 (EA AAK)n、 或(XP)n， n 为自然数； 较佳地， 所述 n为0‑5的自然数。 10.如权利要求2或3所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述第 二功能结合片段结 合细胞因子受体或免疫检查点或免疫检查点配体， 所述第二功能结合片段为细胞 因子或免 疫检查点配体或免疫检查点配体结合蛋白， 或其功 能片段或其突变体； 所述第二功 能结合 片段选自以下任意一种： 人源SIRP家族胞外功能片段、 人干扰素家族功能片段、 肿瘤坏死因 子超家族功能片段、 TGF ‑β 超家族功能片段、 白介素类功能片段、 趋化因子家族功能片段、 集 落刺激因子家族功能片段、 生长因子功能片段或其 突变体。 11.如权利要求10所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述第 二功能结合片段为人 源SIRPα 胞外D1结构域或其 突变体。 12.如权利要求10所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述干扰素受体为I型或II 型人干扰素受体， 优选人干扰素γ(IFN ‑γ)或人干扰素β(IFN ‑β )的受体。 13.如权利要求10所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述第 二功能结合片段为白 介素、 其截短体， 或其 突变体。 14.如权利要求13所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述白介素为免疫调节或趋 化因子， 选自以下任意一种： IL ‑1家族、 IL ‑2家族、 IL ‑3家族、 IL ‑6家族、 IL ‑8家族、 IL ‑10家权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114195901 A 2族、 IL‑12家族和IL‑17家族。 15.如权利要求1 ‑14任一项所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述第 一功能结合 片段靶向选自下列靶标中的任意一种 或多种： 5T4、 AGS ‑16、 ALK1、 ANG ‑2、 B7‑H3、 B7‑H4、 c‑ fms、 c‑Met、 CA6、 CD123、 CD19、 CD20、 CD22、 CD24、 EpCAM、 CD30、 CD32b、 CD37、 CD38、 CD40、 CD52、 CD70、 CD71、 CD74、 CD79b、 CD80、 CD83、 CD86、 CD98、 CD206、 CEA、 CEACAM5、 CLDN18.2、 CLDN6、 CS1、 CCR5、 CXCR4、 DLL ‑4、 EGFR、 EGFRvIII、 EGP ‑1、 ENPP3、 EphA3、 ETBR、 FGFR2、 FN、 FR ‑α、 GCC、 GD2、 GPC‑3、 GPNMB、 HER2、 HER3、 HLA ‑DR、 ICAM‑1、 IGF‑1R、 IL‑3R、 LIV‑1、 MSLN、 MUC16、 MUC1、 NaPi2b、 结合素 ‑4、 Notch 2、 Notch 1、 PD‑1、 PD‑L1、 PD‑L2、 PDGFR ‑α、 PS、 PSMA、 SLTRK6、 STEAP1、 TEM1、 TIGIT、 VEGFR、 CD25、 CD27L、 DKK ‑1、 CSF‑1R、 MSB0010718C、 BCMA、 CD138、 TROP2、 Siglec15、 CD15 5和AFP； 较佳地， 所述第二功能结合片段包含人源SIRPα胞外D1结构域或其突变体、 人干扰素β 或人干扰素γ、 白介素、 其截短体或突变体， 所述第一功能结合片段靶向肿瘤细胞或免疫细 胞。 16.如权利要求1 ‑14任一项所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述双特异性重组 蛋白由A链和B链组成， 所述A链与B链通过分子间作用力结合， 或通过共价键结合， 或通过盐 键结合， 或通过 上述结合方式 中的两种或三种的组合而结合。 17.如权利要求16所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述Fc区包含Fc区天然序列 或Fc非天然序列。 18.如权利要求17 所述的双特异性重组蛋白， 其特 征在于， 所述Fc区为人 Fc区； 较佳地， 所述A链和B链的Fc区是通过knobs ‑into‑holes结合的； 和/或， 所述Fc区为人 IgG的Fc区； 更佳地， 所述Fc区为人IgG1或IgG4的Fc区。 19.如权利要求17或18所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述CL结构域的C末端 或CH1结构域的C末端或第二功能结合片段的C末端与所述Fc区直接连接或通过接头序列连 接。 20.如权利要求17或18所述的双特异性重组蛋白， 其特征在于， 所述第 一功能结合片段 为靶向选自下列靶标的抗原结合片段中的任意一种或多种： 5T4、 AGS ‑16、 ALK1、 ANG ‑2、 B7‑ H3、 B