(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111223375.0 (22)申请日 2021.10.20 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113817078 A (43)申请公布日 2021.12.21 (73)专利权人 吉林农业大 学 地址 130116 吉林省长 春市净月开发区新 城大街28 88号 (72)发明人 王迪　曲一笛　杨洪欣　李思雨　 李玉　刘洋　李兰洲　 (74)专利代理 机构 北京棘龙知识产权代理有限 公司 11740 专利代理师 褚晓佳 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01)A61K 31/715(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A23L 33/125(2016.01) 审查员 徐立超 (54)发明名称 基于免疫调控具有抗结直肠癌功效的杨黄 菌多糖及用途 (57)摘要 本发明提供一种基于免疫调控具有抗结直 肠癌功效的杨黄菌多糖及用途， 具有调节免疫功 能作用， 能够调控肠道菌群物种组成数量、 种群 丰度及均匀度， 具有抑制肿瘤生长及调控T细胞 活化相关生化指标作用， 可以用于制备治疗结直 肠癌药品及保健品。 权利要求书1页 说明书9页 附图14页 CN 113817078 B 2022.11.18 CN 113817078 B 1.一种杨树桑黄菌多糖， 其特征在于： 分子量为22.5kDa， 主要包括6种单糖:Fuc、 Gal、 Glc、 Man、 Fru及GlcUA， 其摩尔质量比为24.473:42.942:1 1.892:19.988:0.637:0.068； 其中， 杨树桑黄 菌多糖的制备 方法， 包括以下步骤： (1)杨树桑黄 菌子实体超微粉碎成粉末， 过15 0目筛； (2)加入质量20倍质量的石油醚进行脱脂， 加热回流2小时， 回流脱脂两次后， 烘干菌 粉； (3)加入质量10 ‑50倍质量的去离子水， 于70 ‑90℃水浴中提取2小时， 提取两次， 合并溶 液； (4)冷却后4000rpm条件离心20分钟， 取上清， 旋转蒸发浓缩至1/5 ‑1/10体积， Sevag法 去蛋白， 旋蒸除去残留的有机试剂后， 透析袋透析12 ‑48h， 浓缩至适当浓度； (5)调节乙醇终浓度至85％(v/v)进行沉淀， 4℃条件过夜， 离心收集沉淀， 进行冻干， 即 获得杨树桑黄 菌粗多糖； (6)将杨树桑黄菌粗多糖用去离子水溶解， 上样于DEAE  Sepharose  Fast Flow离子交 换柱(5cm ×30cm)层析： 在1.0mL/min的流速下， 分别以0、 0.1、 0.3和0.5mol/L  NaCl进行洗 脱， 并用洁净、 干燥的试管收集， 收集量为8mL/管， 将收集到的糖采用硫酸 ‑苯酚法进行检 测， 绘制出洗脱曲线， 将峰值糖进行合并， 浓 缩， 冻干， 备用； (7)将通过DEAE  Sepharose  Fast Flow离子 交换柱获得的杨树桑黄菌多糖冻干粉末溶 于0.15mol/L  NaCl， 上样于HiLo ad 16/600Superdex  200prep grade柱： 以0.45mol/LNaCl 洗脱， 流速为0.5mL/min， 将自动收集器设置为体积为2mL/管， 采用苯酚 ‑硫酸法测定多糖含 量， 收集主峰， 旋转蒸发浓缩至1/10体积,经透析除盐， 蒸发浓缩， 冻干后即获得杨 树桑黄菌 多糖。 2.根据权利要求1所述的一种杨树桑黄 菌多糖， 其特 征在于： 杨树桑黄菌多糖主要有10个糖苷片段组成， 其中糖苷片段t ‑Gal(p)、 6 ‑Gal(p)及2,6 ‑ Gal(p)摩尔比例分别为1.74％， 34.5 0％和18.96％。 3.根据权利要求1或2所述的一种杨树桑黄 菌多糖在制备治疗结直肠癌药物中的用途。 4.一种药物制剂， 其特征在于， 以权利要求1所述杨树桑黄菌多糖为活性成分， 同时含 有一种或多种药 学上可接受的载体物质和/或辅剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113817078 B 2基于免疫调控具有抗 结直肠癌功效的杨黄菌多糖及用途 技术领域 [0001]本发明提供一种基于免疫调控具有抗结直肠癌功效的杨黄菌多糖及用途， 公开一 种杨树桑黄 菌多糖及其结构， 基于免疫调控具有抗结直肠癌功效， 属于医药技 术领域。 背景技术 [0002]结直肠癌是引发与肿瘤相关死亡的主要癌症之一， 早期结直肠癌患者经治疗5年 存活率可以达到80%， 晚期患者经治疗5年存活率仅为 10%。 约有5%的结直肠癌患者发病 与遗 传性疾病 （包括Lynch综合症， 家族性腺癌性息肉病和MYH相关性息肉病等） 相关， 约95%的结 直肠癌患者疾病的发生无明显遗传相关性， 饮食、 年龄和 生活习惯等因素可能与这一部分 结直肠癌的发生发展相关。 随着测序技术的发展， 肠道菌群在结直肠癌中的作用逐渐被发 现， 肠道菌群的次级代谢产物中短链脂肪酸能够直接抑制结直肠癌的病理学进展。 基于肠 道菌群微 生物组学开发结直肠癌治疗手段 可能是新型有效的结直肠癌治疗策略。 [0003]目前结直肠癌的治疗以手术治疗为主， 放化疗为辅。 随着肿瘤免疫学、 分子生物学 的发展， 免疫治疗已经成为结直肠癌治疗的重要治疗策略之一。 基于治疗机制， 相关疗法可 分为主动免疫和被动免疫两类。 特异性主动免疫治疗主要包括全肿瘤细胞疫苗、 树突状细 胞疫苗以及分子疫苗； 非特异性主动免疫治疗主要通过增强免疫系统功能， 激活免疫系统 对肿瘤细胞的免疫杀伤反应从而实现抗肿瘤的目的。 被动免疫治疗： 通过引入外源性免疫 效应物质， 在不刺激机体免疫应答的基础上， 发挥免疫治疗作用。 随着肿瘤 免疫学的发展， 免疫治疗有望成为结直肠癌治疗的主要治疗策略之一， 在增加患者生存率， 提升患者生活 质量方面发挥重要作用。 [0004]杨树桑黄因其子实体生长在杨树上而得名， 是传统菌物药 “桑黄”基源物种之一,   在我国， 杨树桑黄菌主要分布于中国长白山和小兴安岭地区。 桑黄是国际公认的生物治癌 领域中效率最高的大型真菌， 有报道杨树桑黄菌具有与传统桑黄同样的抑制肿瘤的功效。 多糖是桑黄发挥功效的主要成分， 研究表明杨 树桑黄菌具有良好的免疫调节、 抗菌、 抗氧化 和保肝护肝等多种药理活性， 但尚未有研究在AP C小鼠模型中， 对杨 树桑黄菌多糖基于免疫 调节的抗结直肠癌活性进行研究。 发明内容 [0005]本发明公开了一种抗结直肠癌功效的杨树桑黄菌多糖及制备方法， 以杨树桑黄菌 子实体为原料， 通过提取、 分离得到一种杨树桑黄菌多糖， 对其进 行结构表征及基于免疫调 控抗结直肠癌活性进行探究。 [0006]本发明还进一 步提供了杨黄 菌多糖抗结直肠癌的医用 用途。 [0007]本发明提供一种杨树桑黄 菌多糖， 其特 征在于： [0008]分子量为22.5  kDa， 主要包括6种单糖:Fuc、 Gal、 Glc、  Man、 Fru及 GlcUA， 其摩尔 质量比为24.473:  42.942: 11.892: 19.988: 0.637: 0.068。 杨树桑黄菌多糖主要有10个 糖苷片段组成，  Gal含量比例最高， 其中糖苷片段t ‑Gal(p)、 6 ‑Gal(p)及2,6 ‑Gal(p)摩尔比说　明　书 1/9 页 3 CN 113817078 B 3