(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111245473.4 (22)申请日 2021.10.26 (71)申请人 维肽瀛 （上海） 生物技 术有限公司 地址 200000 上海市虹口区飞 虹路360弄9 号6层 （集中登记地） (72)发明人 李坤鹏　 (74)专利代理 机构 南昌合达信知识产权代理事 务所(普通 合伙) 36142 代理人 李旦 (51)Int.Cl. C07K 7/06(2006.01) C07K 7/08(2006.01) C07K 14/00(2006.01) C12N 5/0783(2010.01) C12N 5/0784(2010.01)A61K 38/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 多肽组合物、 T淋巴细胞以及其在抗肿瘤细 胞中的应用 (57)摘要 本申请涉及抑制肿瘤的多肽组合物、 T淋巴 细胞及抗肿瘤的应用。 该多肽组合物包括如SEQ   ID NO.1～3所示和/或如SEQ  ID NO.1～5所示的 多肽。 此5种多肽能够刺激外周血单核细胞产生 特异性细胞毒性T淋巴细胞和特异性辅助性T淋 巴细胞， 此两种T淋巴细胞能够于体外特异性地 杀灭人胃癌细胞， 人子宫颈癌细胞、 人肝癌细胞 和人肺癌细胞， 于体内能够 有效刺激小鼠形成杀 灭BEL7402细胞的T淋巴细胞和/或巨噬细胞， 提 高荷瘤小鼠的生存时间。 该多肽组合物和T淋巴 细胞具有应用于制备抗肿瘤相关制剂的广泛应 用前景。 权利要求书1页 说明书11页 附图3页 CN 113943347 A 2022.01.18 CN 113943347 A 1.一种抑制肿瘤的多肽组合物， 包括如下序列的3条多肽： QCKTCQVLE HVVRVNARVRIRK F， 如SEQ ID NO.1所示； SDELVRHHNVLEH， 如SEQ ID NO.2所示； HHNMHQRNMVLE HVV， 如SEQ ID NO.3所示。 2.根据权利要求1所述的多肽组合物， 还 包括如下序列的2条多肽： NLMQYTSQL， 如SEQ ID NO.4所示； KRMFKLSHLQYHSRKH， 如SEQ  ID NO.5所示。 3.一种T淋巴细胞， 由权利要求1或2所述的多肽组合物诱 导产生。 4.根据权利去3所述的T淋巴细胞， 其制备 过程包括： 获得纯化的外周血 单核细胞， 所述外周血 单核细胞表达 HLA‑A*0201基因； 获得载肽DC细胞， 所述载肽DC细胞由所述外周 血单核细胞诱导制得的DC细胞负载如 SEQ ID NO.1～3所示的多肽组合物或如SEQ  ID NO.1～5所示的多肽组合物制得； 获得所述T淋巴细胞， 所述T淋巴细胞由所述载肽DC细胞和所述DC细胞共培养制得， 所 述T淋巴细胞为细胞毒性T淋巴细胞。 5.根据权利要求 4所述的T淋巴细胞， 获得 所述细胞毒性T淋巴细胞的步骤具体包括： 以所述DC细胞为CTLs前体细胞与所述载肽DC细胞以数量比为1:20共混接种至含5ng/ mL IL‑7、 10％AB型 血清的RPMI  1640培养液中， 37℃5％CO2培养； 于培养7天后换液一半， 再次按照所述DC细胞与所述载肽DC细胞数量比为1:20共混接 种； 继续培养4天后， 向培养体系中均加入的10U/mLIL ‑2， 继续培养1天， 即可得到所述细 胞 毒性T淋巴细胞。 6.根据权利 要求3所述的T淋巴细 胞， 还包括由如SEQ  ID NO.4～5所示的多肽诱导的辅 助性T淋巴细胞。 7.根据权利要求6所述的T淋巴细胞， 其中， 所述辅助性T淋巴细胞由以下 方法制得： 获得预包被的孔板， 所述 孔板用anti ‑hCD3e单抗进行包被； 向包被的孔板中加入培养液和纯化的外周血单核细胞， 所述培养液为包含1μg/mL   anti‑hCD28、 1ng/mL  IL‑12， 10ng/mL  IL‑6、 10ng/mL  IL‑23、 5ng/mL  TGF‑β和1μg/mL的如 SEQ ID NO.4～5所示至少之一的多肽的RPMI  1640培养液， 并调整外周血单核细胞的浓度 为106个/mL； 在5 ％CO2细胞培养箱中培养3天后半量换液， 继续培养3天， 即可得到所述辅助 性T淋巴细胞。 8.权利要求1或2所述的多肽组合物在制备抗肿瘤细胞制剂中的应用； 其中， 所述肿瘤 细胞包括人胃癌细胞、 人子宫颈癌细胞、 人肝癌细胞和人肺癌细胞至少一项。 9.权利要求3～7任一项所述的T淋巴细胞在制备抗肿瘤细胞制 剂中的应用， 其中， 所述 肿瘤细胞包括人胃癌细胞、 人子宫颈癌细胞、 人肝癌细胞和人肺癌细胞至少一项。 10.根据权利要求8或9所述的应用， 其中， 所述制剂选自细棒型埋植剂、 微型渗透泵埋 植剂、 注射型埋 植剂和微球注射剂中的一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113943347 A 2多肽组合物、 T淋巴细胞以及其在抗肿瘤细胞 中的应用 技术领域 [0001]本申请涉及抗肿瘤技术领域， 尤其涉及多肽组合物、 T淋巴细胞以及其在抗肿瘤细 胞中的应用。 背景技术 [0002]人类白细胞抗原基因复合体(human  leukocyte  antigen gene complex， HLA)基 因复合体定位于人第6号染色体短臂6p21.31， 其共有224个基因座位， 128个为功能性基因 (有产物表达)， 6个为假基因(无产物表达)， 其表达的强弱直接影响机体的免疫反应。 研究 发现， HLA具有高度多态性， 其与疾病具有一定的关联， 如HLA ‑A1B8DR3是重症肌无力的遗传 表型， HLA ‑B27阳性个体强直性脊柱炎的患病率明显增高、 HLA ‑Cw6是银屑病的易 感基因等。 在人类恶性肿瘤中HLA异常表达的研究则是热点之一。 研 究发现， HLA ‑G在非小细胞肺癌中 有异常表达， HLA ‑D RB1*13:01可能为 直结肠癌的潜在标记基因。 [0003]国内外已有许多学者研究了肿瘤与HLA基因的相关性， 虽然目前可见一些肿瘤高 发人群中发现某些易感基因， 但是在不同的肿瘤细胞中， HLA基因具有多态 性以及不同的易 感性。 因此， 针对不同癌细胞的HLA基因需要具有相同的易感性HLA基因， 以作为治疗靶点， 能够提高针对癌细胞治疗的广谱性。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本申请试图寻找到一种具有更加广谱的抑制肿瘤效果的HLA基因治疗 靶点， 并以此开发对应的治疗药物。 [0005]第一方面， 本申请实施例公开了一种抑制肿瘤的多肽组合物， 包括如下序列的3条 多肽： [0006]QCKTCQVLE HVVRVNARVRIRK F， 如SEQ ID NO.1所示； [0007]SDELVRHHNVLEH， 如SEQ ID NO.2所示； [0008]HHNMHQRNMVLE HVV， 如SEQ ID NO.3所示。 [0009]在本申请实施例中， 所述多肽组合物还 包括如下序列的2条多肽： [0010]NLMQYTSQL， 如SEQ ID NO.4所示； [0011]KRMFKLSHLQYHSRKH， 如SEQ  ID NO.5所示。 [0012]第二方面， 本申请实施例公开了一种T淋巴细胞， 由第一方面所述的多肽组合物诱 导产生。 [0013]在本申请实施例中， 所述T淋巴细胞的制备 过程包括： [0014]获得纯化的外周血 单核细胞， 所述外周血 单核细胞表达 HLA‑A*0201基因； [0015]获得载肽DC细胞， 所述载肽DC细胞由所述外周血单核细胞诱导制得的DC细胞负载 如SEQ ID NO.1～3所示的多肽组合物或如SEQ  ID NO.1～5所示的多肽组合物制得； [0016]获得所述T淋巴细胞， 所述T淋巴细胞由所述载肽DC细胞和所述DC细胞共培养制 得， 所述T淋巴细胞为细胞毒性T淋巴细胞。说　明　书 1/11 页 3 CN 113943347 A 3