(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111090518.5 (22)申请日 2021.09.17 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113925966 A (43)申请公布日 2022.01.14 (73)专利权人 西安电子科技大 学 地址 710065 陕西省西安市雁塔区太白南 路2号 (72)发明人 宋江鲁奇 　李欢　张嘉嘉　张喆　 姚博　马琳　于跃　周慧鑫　 (74)专利代理 机构 西安志帆知识产权代理事务 所(普通合伙) 61258 专利代理师 侯峰　韩素兰 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01)A61K 47/42(2017.01) A61K 47/26(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 49/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) 审查员 陈宇蓉 (54)发明名称 快速响应型细胞核靶向纳米诊疗探针的制 备方法 (57)摘要 本发明公开了一种快速响应型细胞核靶向 纳米诊疗探针及其制备方法和应用， 诊疗探针， 由以下各项组成： 负载靶向标记物 ‑金丝桃素复 合物的聚合物胶束的核； 中间为多孔Au壳层； 最 外层修饰DNA ‑载脂蛋白缀合物。 本发明提供的快 速响应型细胞核靶向纳米诊疗探针具有细胞内 快速富集、 快速响应的特点； 本发明提供的探针 具有核靶向性， 在光刺激下在亚细胞水平实现肿 瘤细胞的精 准杀灭作用； 本发明提供的探针还具 有热成像、 药物受控释放、 光热治疗效果， 具有优 良的生物相容性， 可以用于生物医学研究和应 用； 本发明使用的DNA修饰的纳米粒子可以快速 穿透细胞膜， 在细胞质富集， 有可操作性强、 可批 量生产、 重复性高等优点， 具有很高的实用价 值。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 113925966 B 2022.10.04 CN 113925966 B 1.一种快速响应型细胞核靶向纳米诊疗探针的制备方法， 其特征在于， 所述快速响应 型细胞核靶向纳米诊疗探针由以下 各项组成： 负载靶向标记 物‑金丝桃素复合物的聚合物胶束的核； 中间为多孔Au壳层； 最外层修饰DNA ‑载脂蛋白缀 合物; 其中所述靶向标记物为TAT肽  ， 组成为Gly ‑Arg‑Lys‑Lys‑Arg‑Arg‑Gln‑Arg‑Arg‑Arg‑ Pro‑Gln， 分子量 为1621； 所述Au壳层的孔径为8.5nm， 厚度为20nm； 所述DNA的核苷酸序列为  TGTCGACGTC CATATTCTCCCTCACAGC； 所述载脂蛋白为ApoB ‑100； 所述制备 方法包括以下步骤： 步骤1， 负载靶向标记物 ‑金丝桃素复合物的聚合物胶束制备： 将靶向标记物 ‑金丝桃素 复合物的D MSO溶液与硬脂酸和胆固醇的甲苯溶液混合、 加热、 提纯， 获得中间物A； 将所述中 间物A加入到聚合物M的Tris ‑HCl溶液中， 在0～40℃下搅拌、 提纯， 获得聚合物胶束 核； 其中， 所述靶向标记物 ‑金丝桃素复合物的DMSO溶液浓度为1～500mg/mL； 所述硬脂酸 和胆固醇的甲苯溶液中， 硬脂酸的浓度为1～25mg/mL， 胆固醇的浓度为1～15mg/mL； 所述聚 合物M的Tris ‑HCl溶液的浓度为1～ 200mmol/mL； 步骤2， 中间多孔Au壳层的制备： 在所述聚合物胶束核 的外层生长多孔Au壳层， 使用超 滤膜过滤提纯， 重新分散在PBS缓冲液中， 获得外包多孔Au壳的聚合物胶束 核； 步骤3， DNA ‑载脂蛋白缀合物的修饰： 将DNA的Tris ‑HCl溶液加入到NaCl溶液中， 控制 pH， 然后加入载脂蛋白的PBS缓冲液混合， 获得DNA ‑载脂蛋白缀合物， 然后加入到外包多孔 Au壳的聚合物胶束 核的PBS分散液中， 搅拌 反应， 提纯； 其中， 所述DNA的溶液浓度为1～10mmol/mL， 所述载脂蛋白的溶液浓度为1～10mmol/ mL。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤1中， 在靶向标记物 ‑金丝桃 素复合物与脂肪酸和胆固醇的混合过程中， 加热温度为20～60℃， 时间为0.1～4h， 金丝桃 素与硬脂酸的摩尔比为1:0.01～1:0.1， 硬脂酸与胆固醇的摩尔比为1:0.01～1:10； 然后冷 却， 在‑20℃冷冻干燥， 获得中间物 A。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤1中， 所述聚合物M的分子式 为 分子量为14000～20000； 中间物A与聚合物M的 Tris‑HCl溶液混合过程中， 中间物A与聚合物M的质量比为1:20～1:1000， 混合温度为4℃， 时间为24h 。 4.根据权利 要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤3中， 控制 pH为7.5；  DNA与载 脂蛋白的摩尔比为1:0.01～1:10； DNA ‑载脂蛋白缀合物与外包多孔Au壳的聚合物胶 束核中 的金丝桃素的摩尔比为1:0.1～1:20 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113925966 B 2快速响应型细胞核靶向纳米诊疗探针的制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于纳 米材料和纳米生物医学技术领域， 具体涉及一种快速响应型细胞核 靶向纳米诊疗探针及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]纳米材料是一类具有独特物理化学性质的功能材料。 随着科技的不断进步和发 展， 人们开 发出了一系列在医学、 光电、 能源、 机械、 农业等领域中具有极大应用价值的纳米 材料。 [0003]癌症作为人类健康的杀手， 成为医学领域中首要的研究对象。 从其临床症状、 到其 发病根源， 人们投入了大量的研究精力。 从生物医学工程角度来看， 在细胞水平上研究肿瘤 细胞的产生、 分裂、 转移对于癌症的精准治疗具有重要的意义， 然而， 传统的治疗手段(如手 术切除、 化疗和放疗)存在 诸多的副作用； 因此， 开 发针对肿瘤细胞具有诊断、 治疗多功能的 纳米探针具有重要的灵床意 义。 [0004]光动力疗法是近年来新兴的肿瘤治疗手段， 是一种已经在临床上获得批准的治疗 程序， 它依赖于光敏剂的给药， 然后用合适波长的光照射。 在氧气存在的情况下， 在此过程 中会产生细胞毒性物质活性氧， 导致直接细胞死亡、 血管系统损伤和炎症反应， 金是一种贵 金属， 具有极佳的延展性， 是电、 声的良导体。 当其尺寸降低在200nm以下时， 受到入射光照 射， 具有显著的表面等离激元增强效应， 可以用于增强拉曼、 荧光、 吸收， 且具有高效的光热 转换特性， 因此 可以用于生物医学中的光热治疗剂。 [0005]将光敏剂和金纳米粒子偶联， 得到具有诊疗功能的复合纳米材料， 不仅可以使材 料同时具备光热成像、 光热治疗剂的性质， 而且受控释放的光敏剂可以产生大量的活性氧， 从而对癌细胞进行 快速杀灭， 对于临床上肿瘤 细胞的诊断和治疗具有重要的应用价 值。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明的主要目的在于提供一种快速响应型细胞核靶向纳 米诊疗探针 及其制备 方法和应用。 [0007]为达到上述目的， 本发明的技 术方案是这样实现的： [0008]本发明实施例提供一种快速响应型细胞核靶向纳米诊疗探针， 由以下 各项组成： [0009]负载靶向标记 物‑金丝桃素复合物的聚合物胶束的核； [0010]中间为多孔Au壳层； [0011]最外层修饰DNA ‑载脂蛋白缀 合物。 [0012]上述方案中， 该制备 方法包括以下步骤： [0013]步骤1， 负载靶向标记物 ‑金丝桃素复合物的聚合物胶束制备： 将靶向标记物 ‑金丝 桃素复合物的D MSO溶液与硬脂酸和胆固醇的甲苯溶液混合、 加热、 提纯， 获得中间物A； 将所 述中间物 A加入到聚合物M的Tris ‑HCl溶液中， 在0～40℃下搅拌、 提纯， 获得聚合物胶束 核； [0014]步骤2， 中间多孔Au壳层的制备： 在所述聚合物胶束核的外层生长多孔Au  壳层， 使说　明　书 1/5 页 3 CN 113925966 B 3