(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111177854.3 (22)申请日 2021.10.09 (71)申请人 山东新创生物科技有限公司 地址 250101 山东省济南市高新区汉峪金 谷A2-3栋7层 (72)发明人 王勇　朱红　王丹　刘园园　 王少鹏　邢立超　徐兴鲁　果双双　 牛卉　姜圣彪　杨冬霞　郜玉霞　 邵石丽　李晓楠　郑嘉辉　张蓉　 韩停　 (74)专利代理 机构 济南竹森知识产权代理事务 所(普通合伙) 37270 代理人 朱家富 (51)Int.Cl. A61K 39/395(2006.01)A61K 35/742(2015.01) A61K 9/19(2006.01) A61K 9/08(2006.01) A61K 47/26(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12N 1/04(2006.01) C12R 1/145(2006.01) (54)发明名称 戈氏梭菌 芽孢联合P D-1抗体的应用 (57)摘要 本发明涉及戈氏梭菌联合帕博利珠单抗 (Pembrolizumab)在癌症治疗中的应用。 本发明 首次发现戈氏梭菌芽孢联合帕博利珠单抗 (Pembrolizumab)可以显著提高抗结肠癌的疗 效， 同时降低 帕博利珠单抗(Pembrolizumab)的 使用剂量， 高效低毒。 戈氏梭菌溶瘤可通过多种 方式影响TME免疫原性， 使TME从一个免疫抑制状 态变成免疫激活状态， 同时调节免疫抑制性TME， 打破免疫耐受。 在最佳组合条件 下戈氏梭菌芽孢 与帕博利珠单抗(Pembrolizumab)联合约有2 0％ 小鼠肿瘤组织彻底清除， 将PD ‑1抗体治疗肿瘤患 者的受益范围扩大， 甚至对PD ‑1抗体治疗失败患 者也有突出疗效。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 113995835 A 2022.02.01 CN 113995835 A 1.戈氏梭菌芽孢联合帕博利珠单抗(Pembrolizumab)在制备治疗结肠癌医药制品中的 应用。 2.一种治疗结肠癌的药物， 药物中的药效成分包括戈氏梭菌芽孢和帕博利珠单抗 (Pembrolizumab)。 3.如权利要求2所述的药物， 其特征在于， 所述的戈氏梭菌为 戈氏梭菌MW ‑DCG‑HNCv‑18 菌株或者驯化后获得的菌株。 4.如权利要求3所述的药物， 其特征在于， 戈氏梭菌MW ‑DCG‑LCv‑26菌株保藏于澳大利 亚国家计量研究院， 菌株编号 为V12/001486。 5.如权利要求3所述的药物， 其特征在于， 所述戈氏梭菌驯化后获得的菌株为MW ‑DCG‑ HNCv‑18菌株， 该菌株 保藏于澳大利亚国家 计量研究院， 菌株 保藏号V12/001485； 或者， 所述 戈氏梭菌驯化后获得的菌株为MW ‑DCG‑CCv‑17菌株， 该菌株保藏于澳大利亚国家计量研 究 院， 菌株保藏 号V12/001487。 6.如权利要求2所述的药物， 其特 征在于， 所述的戈氏梭菌为芽孢形式。 7.如权利要求6所述的药物， 其特征在于， 所述戈氏梭菌的芽孢形式为冻干粉剂， 其辅 料为1％蔗糖； 优选的， 所述帕博利珠 单抗(Pembro lizumab)为P D‑1抗体(Pembro lizumab)注射液。 进一步优选 的， 戈氏梭菌芽孢冻干粉剂的冻干工艺为： 冻结阶段 ‑40℃4h；‑35℃10min 同时抽真空、 ‑30℃10min、 ‑25℃10min、 ‑20℃26h、 ‑15℃2h、‑10℃10min、 ‑5℃10min、 0℃ 10min、 10℃2h、 15℃10mi n、 20℃3h、 27℃3h冻干制备。 8.如权利要求2所述的药物， 其特征在于， 所述每1 ×107CFU戈氏梭菌芽孢联合浓度1mg/ mL的帕博利珠 单抗(Pembro lizumab)溶 液0.2mg。 9.如权利要求8所述的药物， 其特征在于， 所述帕博利珠单抗(Pembrolizumab)溶液的 溶媒为质量百分比浓度0.9％的氯化钠注射液； 戈氏梭菌芽孢冻干粉的溶媒为灭菌注射用 水和质量百分比浓度0.9％氯化钠注射液。 10.如权利要求2所述的药物， 其特征在于， 所述戈氏梭菌芽孢联合帕博利珠单抗 (Pembrolizumab)的使用顺序为先戈氏梭菌 芽孢后帕博利珠 单抗(Pembro lizumab)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113995835 A 2戈氏梭菌芽孢联合PD ‑1抗体的应用 技术领域 [0001]本发明涉及戈氏梭菌联合帕博利珠单抗(Pembrolizumab)在癌症治疗中的应用， 特别是在结肠癌治疗中的应用， 可显著抑制结肠癌生长， 增强PD ‑1抗体抗肿瘤效果， 属于生 物医药技 术领域。 背景技术 [0002]肿瘤微环境(Tumor  microenvironment， TME)是在肿瘤生长过程中， 由肿瘤细胞、 基质细胞(包括成纤维细胞、 免疫、 炎性细胞以及一些血管内皮细胞等)和细胞外基质以及 浸润在其中的生物分子等共同构成局部稳态环境。 TME为肿瘤发生、 发展、 侵袭等提供了必 要物质基础， 调控肿瘤转移、 复发等多种生物学行为。 同时TME增加肿瘤耐药性和耐辐射性， 降低治疗效果。 TME内的免疫调节在肿瘤发生发展中具有重要功能， 其可通过多种机制， 形 成肿瘤局部免疫抑制。 如何调控TME免疫治疗 策略， 重塑积极的免疫微环境是抗肿瘤治疗的 重点和难点。 [0003]Pembrolizumab是一种PD ‑1抑制剂药物， PD ‑1是一种重要的免疫抑制分子， PD ‑1抗 体临床表现出显著 抗肿瘤效果， 包括对晚期转移患者的持久治疗效果。 一般认 为， 对免疫检 查点阻断剂的敏感性取决于肿瘤新生抗原负荷以及肿瘤微环境(TME)中免疫细胞浸润程度 和组成。 不幸的是， 多 数常见癌症并未表现出大量的突变和免疫细胞浸润， 因此肿瘤 对免疫 检查点抑制剂不敏感， 响应率低， 仅20％患者使用有效。 因此， 开发能使这些肿瘤对免疫治 疗更敏感方法也是目前重点研究方向之一。 [0004]戈氏梭菌(Clostridium  ghonii)为严格厌氧菌， 具有趋肿瘤低氧特性， 仅能定植 在肿瘤乏氧区。 戈氏梭菌溶瘤可募集大量免疫细胞向TME浸润， 包括树突状细胞、 中性粒细 胞、 巨噬细胞在内的先天免疫细胞及CD3+T、 CD4+T、 CD8+T等特异性免疫细胞， 改变TME中免疫 细胞浸润 程度和组成。 同时促进肿瘤中TNF ‑α、 IFN‑γ、 IL‑6等细胞因子和趋化因子表达增 强。 可见， 戈氏梭菌溶瘤可以通过多种方式影响TME免疫原性， 使TME从一个免疫抑制状态变 成免疫激活状态， 打破免疫耐受， 使得戈氏梭菌与免疫检查点抑制剂联用高效抗肿瘤成为 可能。 发明内容 [0005]本发明根据现有技 术的不足， 提供戈氏梭菌 芽孢联合P D‑1抗体的应用。 [0006]本发明技 术方案如下： [0007]戈氏梭菌芽孢联合帕博利珠单抗(Pembrolizum ab)在制备治疗结肠癌医药制品中 的应用。 [0008]一种治疗结肠癌的药物， 药物中的药效成分包括戈氏梭菌芽孢和帕博利珠单抗 (Pembrolizumab)。 [0009]根据本发明优选的， 所述的戈氏梭菌为戈氏梭菌MW ‑DCG‑LCv‑26菌株或者戈氏梭 菌驯化后获得的菌株； 戈氏梭菌MW ‑DCG‑LCv‑26菌株保藏于澳大利亚国家计量研究院， 菌株说　明　书 1/8 页 3 CN 113995835 A 3