(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111267680.X (22)申请日 2021.10.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113980133 A (43)申请公布日 2022.01.28 (73)专利权人 叶鑫淼 地址 312400 浙江省绍兴 市嵊州市浦口街 道杜潭村79号 (72)发明人 张克礼　雷林均　 (74)专利代理 机构 江苏长德知识产权代理有限 公司 32478 专利代理师 王金华 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 15/85(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 WO 20210 57823 A1,2021.04.01 CN 10983 6498 A,2019.0 6.04 US 20162 97881 A1,2016.10.13 US 2020040058 A1,2020.02.0 6 US 2013273 073 A1,2013.10.17 殷郑娜等.嵌合性抗ROR1抗体Fab片段的制 备及鉴定. 《中国免疫学杂志》 .2020,(第13期), 审查员 段珊 (54)发明名称 抗体及其在抗肿瘤中的应用 (57)摘要 本发明涉及抗体及其在抗肿瘤中的应用。 本 发明提供了一种新型靶向ROR1的单克隆抗体， 该 抗体能够与目标抗原人 ROR1高亲和 力结合， 特异 性强， 热稳定性和pH稳定性好， 可有效抑制脱靶 效益。 该抗体可抑制多种造血系统肿瘤细胞和实 体肿瘤细胞生长， 在动物模型中也展现了较强的 抗肿瘤效果， 该抗体在治疗实体肿瘤方面更具优 势， 从而为相关抗肿瘤药物的开发提供了新的研 究基础。 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 附图4页 CN 113980133 B 2022.09.13 CN 113980133 B 1.一种抗ROR1抗体， 其特征在于， 其包含重链可变区和轻链可变区； 所述重链可变区包 含分别如SEQ  ID NO:1、 SEQ  ID NO:2和SEQ  ID NO:3所示的HCDR1、 HCDR2和HCDR3； 所述轻链 可变区包 含分别如SEQ  ID NO:4、 SEQ ID NO:5和SEQ  ID NO:6所示的LCDR 1、 LCDR2和LCDR3 。 2.如权利 要求1所述的抗体， 其特征在于， 所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO.  7所示， 且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO.8所示。 3.权利要求1所述的抗体， 其中所述抗体为单克隆抗体、 嵌合抗体、 人源化抗体或单链 抗体。 4.一种编码如权利要求1 ‑3任一项所述的抗体的核酸。 5.一种包 含如权利要求 4所述的核酸的重组表达载体。 6.一种包 含如权利要求5所述的重组表达载体的重组表达转 化体。 7.一种如权利要求1 ‑3任一项所述抗体的制备方法， 其包括如下步骤： 培养如权利要求 6所述的重组表达转 化体， 从培 养物中获得 所述抗ROR1抗体。 8.如权利要求1 ‑3任一项所述的抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用， 所述肿瘤为 ROR1阳性造血系统恶性肿瘤或实体瘤。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为肺癌、 乳腺癌、 卵巢癌、 慢性淋巴 细胞白血病 、 急性粒细胞白血病或骨髓瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113980133 B 2抗体及其在抗肿瘤中的应用 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤免疫治疗领域和生物技术领域， 具体提供了一种抗体及其在 抗肿 瘤中的应用。 背景技术 [0002]肿瘤因其具有难治愈性、 高死亡率、 低愈后临床表现， 而成为威胁人类健康的最严 重的疾病之一， 为此研究人员先后尝试了多种肿瘤治疗手段和技术， 包括手术治疗、 放射治 疗、 化学药物治疗、 基因治疗等等， 但是截至目前仍未找到行之有效的治疗手段。 随着生物 技术和免疫学研究的深入， 肿瘤免疫治疗和抗肿瘤抗体受到业内的重视， 自上世纪80年代 以来， 全球范围内已有上百种抗体被批准用于肿瘤治疗， 目前每年提交申请进行临床试验 的抗体更是多达数千种。 这是由于抗体治疗具有较高的靶向性和选择性， 且治疗效果明显， 不但可有效抑制肿瘤细胞 的生长和繁殖， 还能够 免于对正常组织或细胞造成不利影响， 保 证患者的正常生活状态， 因而在白血病、 淋巴瘤、 骨髓瘤等造血系统肿瘤和胃癌、 大肠癌、 乳 腺癌、 卵巢癌、 肺癌、 黑色素瘤、 霍奇金淋巴瘤、 鼻咽癌等实体肿瘤中都有广泛应用。 [0003]受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor  tyrosine  kinase‑like orphan  receptor  1， ROR1)是受体酪氨酸激酶(receptor  tyrosine  kinase， RTKs)家族成员之一， 与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性。 人ROR1分子由胞外区、 跨膜区和 胞内区组成， 其胞外区包括一个免疫球蛋白样结构域(immunoglobulin ‑like domain， Ig ‑ like)、 两个富含半胱氨酸卷曲的结构域(cysteine ‑rich domain or frizzled， CRD  or  FZD)和一个kringle(KNG)结构域； 胞内区含有一个酪氨酸激酶结构域(tyrosine  kinase  domain， TKD)、 两个富含丝氨酸/苏氨酸结构域(serine/threonines ‑rich domain， Ser/ ThrD)和一个富含脯氨酸富集结构域(proline ‑rich domain， PRD)。 大量研究显示ROR1在促 进肿瘤的生长和 转移、 诱导肿瘤细胞耐药和抑制细胞凋 亡等方面起到了关键性的作用， 尤 其是ROR1正常组织中低水平表达， 而高表达于多种恶性肿瘤或组织中， 如慢性淋巴细胞白 血病(CLL)、 急性淋巴细胞白血病(ALL)、 乳腺癌、 卵巢癌、 黑色素瘤、 肺腺癌等等。 ROR1在肿 瘤组织中具有高度识别性， 基于这种特性， 使得ROR1成为一种新型的肿瘤特异性标志物和 抗肿瘤靶点。 [0004]针对ROR1靶点， 已经开发出了多种肿瘤免疫疗法， 包括： (1)单克隆抗体， 是由单一 B细胞克隆产生的高度均一、 仅针对某一特定抗原表位的抗体， 该类抗体灵敏度高， 特异性 强， 交叉反应少， 制备成本低， 是目前应用最为广泛的抗体药物。 目前研究人员针对ROR1靶 点开发了多种单克隆抗体， 如JP2021522162A、 WO2021202863A1、 EP3842072A1、 CN112384533A等公开了相应的抗ROR1单克隆抗体； (2)双特异性抗体， 该类抗体含有2种特 异性抗原结合位点， 能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁应， 激发具有导向性的免 疫反应， 进一步增强抗体治疗的靶向性， EP2984107A1公开了针对ROR1和CD3靶点的双特异 性抗体， 可有效抵抗白血病、 弥漫性大B细胞淋巴瘤、 骨髓瘤、 乳腺癌、 肺癌等肿 瘤； (3)嵌合 抗原受体(chimeric  antigen receptor， CAR)T细胞， CAR由两个主要的结构域组成： 胞外域说　明　书 1/7 页 3 CN 113980133 B 3