(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111195536.X (22)申请日 2021.10.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113846065 A (43)申请公布日 2021.12.28 (73)专利权人 冬青南京生物科技有限公司 地址 210000 江苏省南京市经济技 术开发 区恒达路3号科创基地一楼厂房A04区 域 (72)发明人 张克礼　顾超　 (74)专利代理 机构 北京华仁联合知识产权代理 有限公司 1 1588 专利代理师 王松艳 (51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) C12N 15/24(2006.01)C12N 15/85(2006.01) A61K 38/20(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 9/08(2006.01) A61K 9/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 111733129 A,2020.10.02 CN 106890330 A,2017.0 6.27 CN 106978397 A,2017.07.25 CN 105969728 A,2016.09.28 US 2008213895 A1,20 08.09.04 US 20173 55957 A1,2017.12.14 审查员 张起 (54)发明名称 改造的CIK免疫细胞在治 疗癌症中的用途 (57)摘要 本发明涉及改造的CIK免疫细胞在治疗癌症 中的用途。 本发明通过针对IL ‑7的空间结构分析 筛选获得了 特异性的高活性IL ‑7的突变体， 将所 述突变体基因导入到CIK细胞后能够显著的增强 肿瘤杀伤作用， 具有极好的应用效果。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图2页 CN 113846065 B 2022.09.06 CN 113846065 B 1.一种转基因的CIK细胞在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途， 其中所述转基 因的CIK细胞为在CIK细胞中导入了序列如SEQ  ID NO： 2所示的IL ‑7突变体mut3基因序列； 所述癌症是肺腺癌。 2.如权利要求1所述的用途， 其特征在于所述药物组合物包含药学上可接受的载体或 赋形剂。 3.如权利要求1所述的用途， 其特 征在于药物组合给 药途径包括静脉内或皮下 给药。 4.如权利要求3所述的用途， 其特征在于药物组合物为注射剂或适合于在注射前在液 体载体中溶解或悬浮液的固体形式。 5.如权利要求2所述的用途， 其特征在于所述载体是盐水， 葡萄糖， 甘油， 富血小板血浆 或其组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113846065 B 2改造的CIK免疫细胞在治疗癌症中的用途 技术领域 [0001]本发明涉及生物领域， 更具体 的涉及一种改造 的CIK免疫细胞在治疗癌症中的用 途。 背景技术 [0002]CIK是单个核细胞在 CD3单抗和多种 细胞因子(包括IFN ‑γ， IL‑2等)的作用下培养 获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群， 其既具有T淋巴细胞强大的抗 肿瘤活性， 又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿 瘤杀伤 能力。 [0003]CIK细胞中的效应细胞CD3+和CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见， 仅1％― 5％。 CIK特点CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见， 仅1％～ 5％， 在体外经多因子培养28～30天， CD3+CD56+细胞迅速增多， 较培养前升幅可达1000倍以 上。 实验证明， 扩增出的CD3+CD56+细胞来源于CD3+CD56 ‑T细胞， 而非CD3 ‑CD56+NK细胞。 同 时发现在CD3+CD56 ‑的T细胞中， 除CD4 ‑CD8‑T细胞外， 其余三种 T细胞亚群(CD4 ‑CD8+、 CD4‑ CD8‑、 CD4+CD8+)均可通过体外多因子培养而获得CD56分子的表达， 而由于CD4+CD8+细胞和 CD4‑CD8‑细胞在正常人外周血中含量极低而间接提示此CD 3+CD56+细胞绝大多数来源于外 周血中CD4 ‑CD8+T细胞。 而由于CD4 ‑CD8‑T细胞在培养1个月后有近56％的T细胞同时表达 CD56和CD3， 表明其也是CIK细胞的重要来源。 比较CD3+CD56+CIK细胞中表达CD8+和CD8 ‑,的 两群细胞其杀瘤活性没有显着性差异， 提示CIK细胞的细胞毒性与CD3CD56表达成相关趋 势， 而与CD 8的表达未表现出相关性。 [0004]CIK细胞能够通过三种途径 杀灭肿瘤细胞和病毒感染细胞： CIK细胞对肿瘤细胞和 病毒感染细胞的直接杀伤： CIK细胞可以通过不同的机制识别肿瘤细胞， 释放颗粒酶/穿孔 素等毒性颗粒， 导致肿瘤细胞裂解。 CIK细胞释放的大量炎性细胞因子具有抑瘤杀瘤活性： 体外培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子， 如IFN ‑γ、 TNF‑α、 IL‑2等， 不仅对肿瘤细胞有 直接抑制作用， 还 可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。 CIK细胞能够诱导肿 瘤细胞的凋亡： CIK细胞在培养过程中表达FasL( Ⅱ型跨膜糖蛋白)通过与肿 瘤细胞膜表达 的Fas(I型跨膜糖蛋白)结合， 诱 导肿瘤细胞凋亡。 [0005]由于外源性IL ‑2、 IL‑7、 IL‑12可以显着促进 淋巴细胞的生长， 研究表明IL ‑7对T细 胞生长具有直接的作用。 近年来， 随着基因技术的发展， 多种细胞因子基因的转染由于CIK 细胞扩增对外源性细胞 因子有依赖， 因此通过基因转移方法将相关基因转入CIK细胞， 不仅 可减少外源性细胞因子的使用量， 还可提高CIK细胞自身的抗瘤活性。 比如将包含人IL ‑2基 因片段的重组质粒用电穿孔法导入CIK细胞治疗转移性实体瘤， 发现转染后细胞可分泌较 高水平的IL ‑2。 虽然转染前后CIK细胞表 面各种膜蛋白表达并无显着变化， 但体外检测转染 后CIK细胞在增殖率和细胞 杀伤活性上均高于未转染细胞。 [0006]但是目前高活性的外源性细胞因子基 因已经是本领域普遍的追求， 如陈曦等开发 了高效低毒的新型IL ‑2突变体， 但是针对IL ‑7的研究还不够 多。 因此， 开 发IL‑7高效突变体说　明　书 1/7 页 3 CN 113846065 B 3