(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111242145.9 (22)申请日 2021.10.25 (71)申请人 北京理工大 学 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街5 号 (72)发明人 黄渊余　梁兴杰　陆梅　 (74)专利代理 机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 代理人 黄志兴 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 公开了一种 特异性抑制PAK4基因表达的siRNA及其应用。 特 异性抑制PAK4基因表达的siRNA含有完全反向互 补的正义链和反义链， 所述正义链和所述反义链 的核苷酸序列分别为如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID  NO.2、 SEQ ID NO.3和SEQ  ID NO.4、 SEQ ID NO.5 和SEQ ID NO.6、 SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8或 SEQ ID NO.9和SEQ  ID NO.10中的任意一对所 示。 本发明还提供了含有上述siRNA 的药物组合 物。 本发明提供的siRNA药物组合物可有效沉默 小鼠PAK4基因表 达， 阻断Wnt /β‑catenin信号通 路， 促进肿瘤免疫 浸润。 权利要求书2页 说明书9页 序列表4页 附图3页 CN 114196672 A 2022.03.18 CN 114196672 A 1.一种特异性抑制PAK4基因表达 的siRNA， 其特征在于， 所述siRNA含有完全反向互补 的正义链和反义链， 所述正义链和所述反义链的核苷酸序列分别为如SEQ  ID NO.1和SEQ   ID NO.2、 SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4、 SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6、 SEQ  ID NO.7和SEQ  ID  NO.8或SEQ  ID NO.9和SEQ  ID NO.10中的任意 一对所示。 2.根据权利要求1所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA， 其特征在于， 所述正义链 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述反义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.根据权利要求1或2所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA， 其特征在于， 所述正义 链和/或所述反义链的至少一个核苷 酸的核糖基上引入核糖修饰， 所述正义链和/或所述反 义链的磷酸 ‑糖骨架中的磷酸酯基的至少一个为具有修饰 基团的磷酸酯基。 4.根据权利要求3所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA， 其特征在于， 所述核糖修 饰为甲氧基修饰或氟代修饰， 所述具有修饰基团的磷酸酯 基为磷酸二酯键中的氧原子被硫 原子取代而形成的硫代磷酸酯基。 5.根据权利要求4所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA， 其特征在于， 按照5'末端 到3'末端的方向， 所述正义链的第5、 7、 8、 9位的核苷 酸为氟代 修饰的核苷 酸， 所述正义链中 其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸， 所述反义链的第2、 6、 8、 9、 14、 16位的核苷酸为 氟代修饰的核苷酸， 所述反义链中其余位置的核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸； 其中， 所述氟 代修饰的核苷酸为核糖基的2' ‑羟基被氟取代而形成的核苷酸， 所述甲氧基修饰的核苷酸 为核糖基的2'‑羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。 6.根据权利要求3所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA， 其特征在于， 所述具有修 饰基团的磷酸酯基存在于由以下位置所组成的组中的至少一处： 所述正义链的5'末端 端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间； 所述正义链的5'末端 端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间； 所述正义链的3'末端 端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间； 所述正义链的3'末端 端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间； 所述反义链的5'末端 端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间； 所述反义链的5'末端 端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间； 所述反义链的3'末端 端部第1个核苷酸和第2个核苷酸之间； 以及 所述反义链的3'末端 端部第2个核苷酸和第3个核苷酸之间。 7.一种药物组合物， 其特征在于， 该药物组合物含有根据权利要求1至6中任意一项所 述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA。 8.根据权利要求1至6中任意一项所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA和/或根据 权利要求7 所述的药物组合物在制备用于抑制肿瘤 细胞中PAK4基因表达的药物中的应用； 优选地， 所述肿瘤 细胞为小鼠黑色素瘤 细胞和/或小鼠结肠癌细胞。 9.根据权利要求1至6中任意一项所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA和/或根据 权利要求7所述的药物组合物在制备用于阻断肿 瘤细胞中Wnt/β ‑catenin信号通路的药物 中的应用； 优选地， 所述肿瘤 细胞为小鼠黑色素瘤 细胞和/或小鼠结肠癌细胞。 10.根据权利 要求1至6中任意一项所述的特异性抑制PAK4基因表达的siRNA和/或根据 权利要求7 所述的药物组合物在制备用于促进肿瘤组织中免疫细胞浸润的药物中的应用；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114196672 A 2优选地， 所述肿瘤为小鼠黑色素瘤和/或小鼠结肠癌。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114196672 A 3