(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111033156.6 (22)申请日 2021.09.0 3 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113735841 A (43)申请公布日 2021.12.0 3 (73)专利权人 深圳大学 地址 518060 广东省深圳市南 山区粤海街 道南海大道3 688号 (72)发明人 郑多　朱礼志　江承尧　黄均荣　 (74)专利代理 机构 深圳中一联合知识产权代理 有限公司 4 4414 专利代理师 黄志云 (51)Int.Cl. C07D 405/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61K 31/454(2006.01) (56)对比文件 CN 112239469 A,2021.01.19 CN 113321700 A,2021.08.31 CN 111909155 A,2020.1 1.10 审查员 孙静 (54)发明名称 细胞外调节蛋白激酶探针及其制备方法与 应用 (57)摘要 本申请提供了一种如式I所示的细胞外调节 蛋白激酶探针， 该结构上的A环能够专一靶向性 地与ERK1/2激酶结构外侧的非活性位点第178位 半胱胺酸共价结合， 能够有效靶向ERK1/2； 且该 细胞外调节蛋白激酶探针不会抑制ERK 1/2与ATP 结合的能力与激酶活性， 但通过其对ERK 1/2具有 靶向性， 为靶向ERK激酶的蛋白质修饰与标记研 究提供小分子导向基团， 提高抑制剂对细胞外调 节蛋白激酶的药物敏感度， 为细胞外调节蛋白激 酶抑制剂提供探针， 引导细胞外调节蛋白激酶抑 制剂能够靶向作用于细胞外调节蛋白激酶位点， 使抑制剂发挥作用， 提高效果。 权利要求书1页 说明书17页 附图4页 CN 113735841 B 2022.05.17 CN 113735841 B 1.一种细胞外调节蛋白激酶探针， 其特征在于， 所述细胞外调节蛋白激酶探针的结构 通式如式I所示， 式I； 其中， R选自以下 取代基的任意 一种： 、 、 。 2.根据权利要求1所述的细胞外调节蛋白激酶探针， 其特征在于， 所述细胞外调节蛋白 激酶探针与ERK1/2外侧的第178位半胱胺酸共价结合。 3.一种如权利要求1或2所述的细胞外调节蛋白激酶探针的制备方法， 其特征在于， 包 括如下步骤： 获取毛萼香茶菜药材粉末， 采用醇类溶液对所述毛萼香茶菜药材粉末进行回流提取处 理， 再依次进行浓缩分离， 得到毛萼乙素； 其中， 采用醇类溶液对所述毛萼香茶菜药材粉末 进行回流提取 处理的步骤包括： 提供体积百分浓度为80%~85%的甲醇水溶液， 对所述毛萼香 茶菜药材粉末进行回流提取 处理2小时； 再减压回收甲醇， 使浸膏 溶剂浓缩至甲醇的体积百 分浓度为 40%~45%， 得到回流 提取产物； 将所述毛萼乙素与 氧化剂进行加热混合处理后， 进行淬灭反应得到第 一混合物； 其中， 将所述毛萼乙素与氧化剂进行加热混合处理的步骤中， 将所述毛萼乙素与浓度为0.2~0.3  mmol的戴斯 ‑马丁试剂于40~45℃条件下进行混合处理30~40分钟； 进行淬灭反应的步骤中， 提供饱和硫代硫酸钠溶 液和氯化钠溶 液进行混合处 理， 进行淬灭反应； 将所述第一混合物采用有机溶剂进行纯化处理， 并进行浓缩分离得到细胞外调节蛋白 激酶探针； 其中， 所述纯化处理的步骤中， 包括： 将所述第一混合物采用有机溶剂进行第一 萃取处理得到醛化合物粉末， 再将醛化合物粉末进 行溶解后进 行第二萃 取处理； 且， 将所述 第一混合物采用有机溶剂进行第一萃 取处理的步骤中， 将所述第一混合物采用乙酸乙酯进 行第一萃取处理， 将所述醛化合物粉末进行溶解后进行第二萃取处理的步骤中， 将所述醛 化合物粉末与四氢呋喃溶剂、 醋酸混合后， 与硼氢化钠固体反应， 再加入饱和碳酸氢钠水溶 液进行溶解反应后， 采用乙酸乙酯进行第二萃取处 理。 4.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包括细胞外调节蛋白激酶探针和细 胞外调节蛋白激酶抑制剂， 其中， 所述细胞外调节蛋白激酶探针为权利要求 1~2任一所述的 细胞外调节蛋白激酶探针。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113735841 B 2细胞外调节蛋白激酶探针及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本申请属于探针技术领域， 尤其涉及一种细胞外调节蛋白激酶探针及 其制备方法 与应用。 背景技术 [0002]细胞具有极其复杂的生命活动， 这些生命活动都必须受到严格 的调控， 作为一个 开放系统， 它不单单要与外界环境进 行信息交流， 还要在细胞间进 行信息传递。 于是在长期 的进化发展和自然选择的过程中逐步建立起一个复杂的信号转导网络， 它是由不同的信号 传递通路通过相互联系和作用而形成的， 即不同的信号转导通路间存在着 “cross‑ talking”。 在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen ‑activated  protein kinase， MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用， 控制着细胞多种生理过程， 如细胞生长、 发育、 分 裂、 死亡等。 细胞外信号调节 激酶(extrac ellular signal‑regulated kinase， ERK)是MAPK 家族的一员。 [0003]细胞外调节蛋白激酶(extracellular  regulated  protein kinases， ERK)包括 ERK1和ERK2， 是将信号从表面受体传导至细胞核的关键， 磷酸化激活的ERK1/2由胞质转位 到核内， 进而介导Elk ‑1， ATF， Ap ‑1， c‑fos和c‑Jun的转录活化， 参与细胞增殖与分化、 细胞 形态维持、 细胞骨架的构建、 细胞凋亡和细胞的癌变等多种生物学反应。 它的信号传递途径 遵循MAPKs的三级酶促级联反应， 即上游激活蛋 白→MAPK激酶的激酶(MAPKKK) →MAPK激酶 (MAP‑KK)→MAPK。 [0004]当机体出现癌症或者其他疾病时， MAPK通路上游组分发生激活突变， ERK1/2的活 性相应发生上调， 从而导致多种癌症的形成。 而大量的临床 研究表明， 抑制MAPK通路可以抑 制部分癌细胞系的生长， 进而达到控制疾病的目的。 但是， 现有技术提供的MAPK通路的抑制 剂往往无法较好与ERK1/2结合， 进而无法起到较好地抑制作用， 导致无法较好抑制MAPK通 路的机制， 导 致作用效果 不佳。 发明内容 [0005]本申请的目的在于提供一种细胞外调节蛋白激酶探针及 其制备方法与应用， 旨在 解决现有技术中细胞外调节蛋白激酶没有相应的探针， 导致MAPK通路的抑制剂无法较好与 ERK1/2结合的问题。 [0006]为实现上述申请目的， 本申请采用的技 术方案如下： [0007]第一方面， 本申请提供一种细胞外调节蛋白激酶探针， 所述细胞外调节蛋白激酶 探针为Laxiflor in A及其衍生物， 其中， 所述细胞外调节蛋白激酶探针的结构通式如式I所 示，说　明　书 1/17 页 3 CN 113735841 B 3