(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111169305.1 (22)申请日 2021.10.08 (66)本国优先权数据 202011091756.3 2020.10.13 CN (71)申请人 成都弘基生物科技有限公司 地址 610036 四川省成 都市金牛区蜀西路 108号2栋910室 (72)发明人 柯潇　雷刚　 (51)Int.Cl. C12N 15/861(2006.01) C12N 15/62(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 27/02(2006.01)A61P 9/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 编码VEGF拮抗剂的多核苷 酸表达盒、 重组病 毒及相关应用 (57)摘要 本发明涉及编码VEGF拮抗剂的多核苷酸表 达盒、 含有该多核苷酸表达盒的质粒、 宿主细胞、 重组病毒及其组合物和用途。 权利要求书3页 说明书21页 序列表27页 附图1页 CN 114350710 A 2022.04.15 CN 114350710 A 1.一种多 核苷酸表达盒， 其特 征在于， 所述多 核苷酸表达盒包括： 1)表达调控元件； 2)密码子优化的编码VEGF拮抗剂的编码序列。 2.根据权利要求1所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的 胞外结构域2， 和/或所述VEGF拮抗剂包含VEGFR2的胞外结构域3， 和/或所述VEGF拮抗剂包 含VEGFR2的胞外结构域 4， 和/或所述VEGF拮抗剂还 包含免疫球蛋白Fc片段。 3.根据权利要求2所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1的 胞外结构域2， VEGFR2的胞外结构域3； 优选地， 所述VEGF拮抗剂 包含VEGFR1的胞外结构域2， VEGFR2的胞外结构域3和免疫球蛋白Fc片段。 4.根据权利要求3中所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述VEGF拮抗剂包含VEGFR1 的胞外结构域2， VEGFR2的胞外结构域3和VEGFR2的胞外结构域4； 优选地， 所述VEGF拮抗剂 包含VEGFR1的胞外结构域2， VEGFR2的胞外结构域3， VEGFR2的胞外结构域4和免疫球蛋白Fc 片段。 5.根据权利 要求1‑4中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述编码VEGFR1的 胞外结构域2的编码序列包含SEQ  ID NO： 15、 SEQ  ID NO： 16或SEQ  ID NO： 17的序列； 所述编 码VEGFR2的胞外结构域3的编码序列包含SEQ  ID NO： 18、 SEQ  ID NO： 19或SEQ  ID NO： 20的 序列； 所述编码VEGFR2的胞外结构域4的编码序列包含SEQ  ID NO： 21、 SEQ  ID NO： 22或SEQ   ID NO： 23的序列； 所述编码免疫球拮抗剂Fc片段的编码序列包含SEQ  ID NO： 24、 SEQ  ID  NO： 25或SEQ  ID NO： 26的序列。 6.根据权利 要求1‑5中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述VEGF拮抗剂的 编码序列包 含SEQ ID NO： 28、 SEQ  ID NO： 29或SEQ ID NO： 30的序列。 7.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述表达调控元件 包含启动子， 所述启动子选择CBA启动子、 CMV启动子、 CAG启动子或EF1A启动子， 并且所述启 动子序列包 含SEQ ID NO： 1、 SEQ ID NO： 2、 SEQ ID NO： 3或SEQ  ID NO： 4的序列。 8.根据权利要求1 ‑7中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述表达调控元件 包含多腺苷酸化信号， 所述多腺苷酸化信号选自SV40、 HGH、 BGH或β ‑珠蛋白， 并且所述多腺 苷酸化信号序列包 含SEQ ID NO： 5、 SEQ  ID NO： 6、 SEQ ID NO： 7或SEQ  ID NO： 8的序列。 9.根据权利要求1 ‑8中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述多核苷酸表达 盒包括位于侧翼的反向末端重复序列(ITR)； 优选地， 所述ITR是血清型的腺相关病毒ITR， 选自AAV1  ITR， AAV2  ITR， AAV3 ITR， AAV4  ITR， AAV5 ITR， AAV6  ITR， AAV7 ITR， AAV8  ITR， AAV9 ITR， AAV10 ITR， AAV11 ITR和AAV12 ITR。 10.根据权利要求1 ‑9中任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于， 所述多核苷酸表 达盒还包含基因转录调节元件； 优选地， 所述基因转录调节元件为土拨鼠肝炎病毒转录后 元件(WPRE)， 包 含序列SEQ  ID NO： 32。 11.根据权利要求1所述的多 核苷酸表达盒， 其特 征在于， 所述多 核苷酸表达盒包括： 1)CBA启动子序列， 包括SEQ  ID NO： 1的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114350710 A 24)SV40多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 5的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CBA启动子序列， 包括SEQ  ID NO： 1的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)HGH多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 6的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CMV启动子序列， 包括由SEQ  ID NO： 2的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)SV40多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 5的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CMV启动子序列， 包括由SEQ  ID NO： 2的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)HGH多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 6的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CMV启动子序列， 包括由SEQ  ID NO： 2的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)BGH多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 7的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CAG启动子序列， 包括由SEQ  ID NO： 3的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)SV40多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 5的序列； 或者 所述多核苷酸表达盒包括： 1)CBA启动子序列， 包括由SEQ  ID NO： 1的序列； 2)可操作性地连接于启动子序列的编码VEGF拮抗剂的编码序列， 包括SEQ  ID NO： 28的 序列； 3)WPRE元件， 包括SEQ  ID NO： 32的序列； 4)BGH多腺苷酸 化信号序列， 包括SEQ  ID NO： 7的序列。 12.根据权利要求1 ‑11任一项所述的多核苷酸表达盒， 其特征在于所述多核苷酸表达 盒还包含位于启动子和VEGF拮抗剂的编码序列之间的Kozak序列。权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114350710 A 3