(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111109672.2 (22)申请日 2021.09.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113621582 A (43)申请公布日 2021.11.09 (73)专利权人 广州百吉生物制药有限公司 地址 510555 广东省广州市黄埔区中新广 州知识城腾飞一 街2号318- 321房 (72)发明人 张曦　黄智宏　韩德平　燕妮　 王调霞　朱晓娜　王宁　林伟雄　 卢永　 (74)专利代理 机构 上海一平知识产权代理有限 公司 3126 6 专利代理师 徐迅　崔佳佳(51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 15/62(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) 审查员 于地美 (54)发明名称 联合表达CCR2b的工程化免疫细胞及其制备 和应用 (57)摘要 本发明涉及联合表达CCR2b的工程化免疫细 胞。 具体地， 本发明的工程化免疫细胞为T细胞 或 NK细胞。 本发明将 含有NKG2D胞外域的CAR分子和 CCR2b联合表达于CAR ‑T细胞中， 因此既能通过 CCR2b提高CAR ‑T细胞对CCL2、 CCL7等趋化因子的 灵敏度， 向结直肠癌、 卵巢癌、 胰腺癌等病灶高效 迁移， 提高治疗效率； 同时又能通过NKG2D  CAR分 子识别结直肠癌、 卵巢癌、 胰腺癌等细胞表面的 多种靶点抗原， 降低因肿瘤异质性或靶点抗原丢 失而导致疗效下降的风险， 并提高肿瘤治疗的效 果。 权利要求书2页 说明书21页 序列表6页 附图4页 CN 113621582 B 2022.09.02 CN 113621582 B 1.一种工程化免疫细胞， 其特征在于， 所述工程化免疫细胞为T细胞， 并且所述的免疫 细胞具有以下 特征： (a)所述免疫细 胞表达嵌合抗原受体(CA R)， 其中所述CAR靶向肿瘤细胞的表面标志物， 其中所述CAR的抗原结合结构域包括 NKG2D的胞外结构域； 和 (b)所述的免疫细胞表达 外源的CCR2b蛋白； 其中， 所述CAR的结构如式I所示： L‑NKG2D‑H‑TM‑C‑CD3ζ    (I) 式中， L为无或信号肽序列； NKG2D为NKG2D 胞外结构域,其中， 所述NKG2D的胞外结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO: 1第73‑216位所示； H为无或铰链区； TM为跨膜结构域； C为共刺激信号结构域； CD3ζ 为源于 CD3ζ 的胞浆信号传导序列； 所述“‑”为连接肽或肽键 。 2.如权利要求1所述的工程 化免疫细胞， 其特 征在于， L为选自下组的蛋白的信号肽序列： CD 8、 GM‑CSF、 CD4、 CD28或CD137； H为选自下组的蛋白的铰链区： CD 8、 CD28或CD137； TM为选自下组的蛋白的跨膜结构域： CD28或CD 8； C为4‑1BB来源的共刺激信号结构域。 3.如权利要求1所述的工程 化免疫细胞， 其特 征在于， 在式I所示的CAR中， L为SEQ ID No:3所示的信号肽序列； H为SEQ ID No:6所示的铰链区； TM为SEQ ID No:7所示的跨膜结构域； C为SEQ ID No:8所示的共刺激信号结构域； CD3ζ 为SEQ  ID No:9所示的CD3ζ 的胞浆信号传导序列。 4.如权利要求1所述的工程化免疫细胞， 其特征在于， 所述CCR2b蛋白的氨基酸序列如 SEQ ID NO:2所示。 5.一种制备权利要求1所述的工程 化免疫细胞的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (A)提供一待改造的免疫细胞； 和 (B)对所述的免疫细胞进行改造， 从而使得所述的免疫细胞表达权利要求1中所述的 CAR和外源的C CR2b蛋白， 从而获得权利要求1所述的工程 化免疫细胞。 6.一种制剂， 其特征在于， 所述制剂含有权利要求1所述的工程化免疫细胞， 以及药学 上可接受的载体、 稀释剂或赋 形剂。 7.如权利要求6所述制剂， 其特征在于， 所述制剂中所述工程化免疫细胞的浓度为1 × 103‑1×108个细胞/ml。 8.一种如权利要求1所述的工程化免疫细胞在制备用于治疗癌症的药物或制剂中的用 途， 其中， 所述癌症为 NKG2D配体高表达的癌症。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113621582 B 29.如权利要求8所述的用途， 其特征在于， 所述癌症选自下组： 结肠癌、 直肠癌、 卵巢癌、 胰腺癌。 10.如权利要求8所述的用途， 其特征在于， 所述癌症为NKG2D配体高表达和趋化因子高 表达的癌症。 11.一种用于制备权利要求1所述的工程化免疫细胞的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒含有容器， 以及位于容器内的： (1)第一核酸序列， 所述第一核酸序列含有用于表达权利要求1中所述CAR的第一表达 盒， 其中所述CAR的抗原结合结构域为NKG2D的胞外结构域， 其中， 所述NKG2D的胞外结构域 的氨基酸序列如SEQ  ID NO:1第73 ‑216位所示； 和 (2)第二核酸序列， 所述第二核酸序列含有用于联合表达 CCR2b的第二表达盒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 113621582 B 3