(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111062454.8 (22)申请日 2021.09.10 (71)申请人 钦元再生医学 （珠海） 有限公司 地址 519000 广东省珠海市横琴新区宝华 路6号105室-74997 （集中办公区） (72)发明人 黄曦　朱天川　郑葳　 (74)专利代理 机构 广州正明知识产权代理事务 所(普通合伙) 44572 代理人 张丽 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 自分泌TREM2 scFv的嵌合抗原受体细胞及 其制备方法和应用 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 公开了自分 泌TREM2sc Fv的嵌合抗原受体细胞及其制备方法 和应用， 本发明的可自分泌TREM2scFv 的嵌合抗 原受体修饰的免疫细胞， 所述的嵌合抗原受体细 胞可以特异性识别和杀伤高表达肿瘤相关抗原 的肿瘤细胞， 同时自分泌TREM2scfv。 通过在肿瘤 微环境中分泌的TREM2scFv， 可以增强树突状细 胞和巨噬细胞的抗原提呈能力， 促进CAR ‑T细胞 的活化， 减少CAR ‑T细胞的衰竭， 进而促进CAR ‑T 分泌颗粒酶、 穿孔素等杀伤物质， 最终达到提高 CAR‑T细胞抗肿瘤能力的目的。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 113980139 A 2022.01.28 CN 113980139 A 1.一种自分泌TREM2  scFv的嵌合抗原受体， 其特征在于， 包含信号肽、 能够结合肿瘤抗 原的单链可变片段、 铰链区、 跨膜结构域、 共刺激 分子、 免疫受体酪氨酸活化基序、 自剪切肽 段、 抗TRE M2抗体的单链可变片段。 2.根据权利要求1所述的自分泌TREM2  scFv的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述肿瘤抗 原选自AFP、 BCMA、 B7H4、 CD52、 CD56、 CD80、 CDK4/m、 CEA、 CT、 DAM、 EGFR、 ErbB3、 ELF2M、 EMMPRIN、 EpCam、 G250、 GA GE、 GnTV、 HA GE、 HER2、 HPVE7、 HSP 70、 hTERT、 iCE、 IGF1R、 IL2R、 IL5、 LAGE、 LDLR/FUT、 MAGE、 MART1、 MART2、 Mesothelin、 MUCl、 PRAME、 PSMA、 RAGE、 SAGE、 TGFf3、 TPI/m、 VEGF、 WTl、 MLSN。 3.编码权利要求1所述的自分泌TREM2  scFv的嵌合抗原受体的基因序列， 其特征在于， 如SEQ ID NO： 1所示。 4.含有权利要求3所述基因序列的慢病毒载体。 5.表达权利要求1所述嵌合抗原受体的细胞， 其特征在于， 所述细胞为T细胞或者含有T 细胞的细胞群。 6.权利要求5所述细胞的制备 方法， 其特 征在于， 包 含以下步骤： (1)获取特异性可自分泌 TREM2 scFv且靶向肿瘤抗原的嵌合 抗原受体的核酸序列； (2)将特异性可自分泌TREM2  scFv且靶向肿瘤抗原的嵌合抗原受体的核酸序列重组到 慢病毒表达载体中， 获得慢病毒表达质粒； (3)将表达质粒转染至293T细胞； 包装获得病毒颗粒， 经离心浓缩后获得慢病毒浓缩 液； (4)将慢病毒浓缩液感染T淋巴细 胞， 从而获得可自分TREM2  scFv且靶向肿瘤抗原的嵌 合抗原受体修饰的T淋巴细胞。 7.一种靶向治疗肿瘤的药物， 其特征在于， 所述药物含有权利要求1所述的嵌合抗原 受 体， 或者能够表达 权利要求1所述嵌合 抗原受体。 8.根据权利要求7 所述的药物， 其特 征在于， 所述肿瘤为实体瘤或者血 液瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113980139 A 2自分泌TREM2  scFv的嵌合 抗原受体细胞及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 更具体地， 涉及自分泌TREM2  scFv的嵌合抗原受 体细胞及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]CAR‑T细胞疗法， 即嵌合抗原受体T细胞疗法， 是利用基因工程技术， 将 合成的嵌合 抗原受体(CARs)表达在T细胞上， 从而使T细胞能够识别 特地的癌细胞并被高度激活， 从而 更好地杀伤肿瘤细胞。 CAR具有四个主要组件的模块化元件： 抗原结合结构域、 铰链、 跨膜结 构域和细胞内信号结构域。 这些元件都具有独特 的功能， 并且可以通过组成元件的变化来 实现CAR的最佳分子设计。 [0003]目前， 在欧洲和美国已经批准了两款靶向CD19的CAR ‑T细胞产品， 即Yescarta和 Kymriah。 两种产品最大的差别在于其共刺激 结构域： Yescarta是使用CD28， 而Kymriah则是 使用4‑1BB。 Kymriah已被批准用于复发或难治性B细胞恶性肿瘤， 例如25岁以下患者的急性 淋巴细胞白血病(ALL)， 以及两次或以上复发或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)全身 疗法； 而Yescarta主要被批准用于DLBCL和原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)。 迄今为止， 使用CAR‑T疗法时， 成人ALL患者表现出最佳的完全缓解(CR)率(83％ ‑93％)。 但值得注意的 是， 由于在 使用CAR‑T疗法之前通常需要对患者进 行非清髓化疗， 因此这种高缓解率可能不 能完全归功于CAR ‑T疗法。 此外， 儿童ALL患者的完全缓解率也较高， 在67％和90％之间。 相 比之下， DLBCL患者的CR率介于43％和54％之间， 慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者的CR率介 于21％和29％之间。 在CAR ‑T细胞治疗后， 所有患者的疾病复发风险都很高， 一项研 究中显 示有41％的患者在12个月内复发。 [0004]此外， 目前CAR ‑T细胞在实体瘤中的效果普遍较差。 在治疗实体瘤时， CAR ‑T细胞存 在许多局限性， 例如细胞因子释放综合征、 抗原丢失导致的肿瘤逃逸、 趋化因子受体谱不 足、 强直信号 或耗竭导致的CAR ‑T细胞衰竭等。 CAR ‑T细胞一旦进入肿瘤微环 境， 其对肿瘤细 胞的细胞毒性和自身的增殖能力都会受到抑制。 抑制的方式可以是通过接触依赖性的方 式， 也可以通过肿瘤和抑制性细胞分泌的细胞因子介导。 TGF ‑β， IDO， 免疫检查点， 以及抑制 性免疫细胞(髓源抑制细胞)都可以抑制CAR ‑T细胞。 一般情况下， 树突状细胞是引起T细胞 反应的关键调节因子。 在促炎环境中， T细胞遇到树突状细胞后会被有效地激发， 从而引起 针对靶细胞的免疫应答； 但是在缺乏炎症的环境中， T细胞可能会无免疫应答。 例如， IL ‑10 不仅可以损 害树突状细胞的抗肿 瘤功能， 还可以通过下调肿 瘤细胞中TAP1和TAP2的表达， 进而阻止抗原加工和呈递， 使CAR ‑T细胞失去了内源性免疫系统的支持。 TFG ‑β则是由肿瘤 细胞和Treg细胞共同产生的另一种 广泛存在的细胞因子， 它可以抑制T细胞的活化、 增殖和 分化。 而CTLA ‑4和PD‑1则可以通过驱动T细胞进入 无反应状态， 使其无免疫应答。 除此以外， 物理因素如缺氧、 营养缺乏、 低pH的也会导致浸润免疫细胞发生功能障碍。 因此， 有必要对 CAR‑T细胞进一 步修饰， 从而提升 CAR‑T细胞杀伤肿瘤的效果。 [0005]此前已经有文献表明， TREM2 是一种与多种配体相互作用的受体， 其中许多配体是说　明　书 1/6 页 3 CN 113980139 A 3