(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111048314.5 (22)申请日 2021.09.08 (71)申请人 长沙欧邦生物科技有限公司 地址 410001 湖南省长 沙市芙蓉区 蔡锷南 路77号印象天心 2419室 (72)发明人 李娟　郭英球　时贞平　 (74)专利代理 机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 431 13 代理人 卢宏 (51)Int.Cl. A61K 31/585(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 15/14(2006.01) C07J 71/00(2006.01) C07J 19/00(2006.01) (54)发明名称 蟾毒配基类成分的降解物的制备方法和应 用 (57)摘要 本发明公开了蟾毒配基类成分的降解物在 制备治疗乳腺癌药物中的应用。 通过华蟾酥毒 基、 华蟾毒它灵和蟾毒它灵， 及其降解产物去乙 酰基华蟾毒精、 去乙酰基华蟾毒它灵和去乙酰基 蟾毒它灵体外对人乳腺癌MC F‑7细胞抗肿瘤和对 人乳腺上皮MCF ‑10A细胞毒性的实验比较， 发现 去乙酰基华蟾毒精、 去乙酰基华蟾毒它灵和去乙 酰基蟾毒它灵不仅具有显著的抗肿瘤活性， 而且 可有效降低对正常乳腺上皮细胞的毒性， 与降解 前体物质比较， 抗肿瘤作用更安全， 有望成为蟾 酥抗癌作用的关键物质被开发 成抗乳腺癌药物。 权利要求书1页 说明书11页 附图15页 CN 113876783 A 2022.01.04 CN 113876783 A 1.蟾毒配 基类成分的降解物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 蟾毒配基类成分的降解物的制备方法包 括： 用溶剂将蟾毒配基类成分溶解， 调整pH至2.0 ‑9.0， 25℃ ‑45℃反应5 ‑15d， 得到反应产 物， 后将反应物减压浓 缩， 纯化分离得到蟾毒配 基类成分的降解物。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述蟾毒配基类成分的降解物包括去乙酰 基的蟾毒配 基类成分。 4.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述蟾毒配基类成分的降解物包括去 乙酰基华 蟾毒精、 去乙酰基华 蟾毒它灵和去乙酰基蟾毒它灵一种或几种。 5.一种蟾毒配基类成分的降解物的制备方法， 其特征在于， 包括： 用溶剂将蟾毒配基类 成分溶解， 调整pH至2.0 ‑9.0， 25℃ ‑45℃反应5‑15d， 得到反应产物， 后将反应物减压浓缩， 纯化分离得到蟾毒配 基类成分的降解物； 优选的， 所述pH为7 ‑8； 优选的， 所述溶剂为甲醇。 6.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述纯化分离步骤包括将减压浓缩后 的反应产物经ODS反相柱、 正相硅胶柱或葡聚糖凝胶柱中一种或几种进行分离纯化； 优选 的， 所述纯化分离步骤包括将减压浓缩后的反应产 物加甲醇溶解， 上反相硅胶柱色谱， 依次 用2‑3倍柱体积的50%甲醇水溶液、 60%甲醇水溶液和70%甲醇水溶液洗脱， 洗脱速度1mL/ min， 结合TLC收集洗脱液， 减压浓 缩， 制得蟾毒配 基类成分的降解物。 7.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 所述纯化分离步骤包括将减压浓缩后 的反应物上正相硅胶柱， 用4 ‑5倍柱体积的环己烷 ‑三氯甲烷 ‑丙酮混合溶液洗脱， 洗脱速度 2mL/min， 结合TLC收集洗脱液， 6 0℃减压浓 缩， 制得蟾毒配 基类成分的降解物。 8.一种治疗乳腺癌的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物的活性成分包括蟾毒 配基类成分的降解物。 9.根据权利要求8所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述蟾毒配基类成分的降解物包括 去乙酰基的蟾毒配基类成分； 优选的， 所述蟾毒配基类成分的降解物包括去乙酰基华蟾毒 精、 去乙酰基华蟾毒它灵和去乙酰基蟾毒它灵本身或者他们药学上可接受的成盐化合物中 的一种或几种。 10.根据权利要求8所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述药物组合物制备成注射剂、 粉 针剂、 片剂、 胶囊剂、 口服液或膏剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113876783 A 2蟾毒配基类成分的降解物的制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种治疗乳腺癌的蟾毒配 基类成分的降解物的制备 方法和应用。 背景技术 [0002]乳腺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一， 其发病率位于肿瘤发病率的第六 位， 位居女性肿 瘤发病率首位， 近年来乳腺癌发病率逐年上升， 且趋于年轻化， 据2018年 国 家癌症研究机构(IARC)调查的最新数据显示， 乳腺癌在全球女性癌症中的发病率为 24.2％， 位居女性癌症的首位， 其中52.9％发生在发展中国家。 在我国， 每年有30万余女性 被诊断出乳腺癌， 在东部沿海城市及发达地区， 乳腺癌的发病率上升尤其明显。 现代医学研 究表明， 乳 腺癌发病机制复杂， 涉及遗传因素、 基因突变、 机体免疫功能下降、 神经功能异常 等多种病因， 机制不清且十 分复杂。 目前， 临床上治疗乳 腺癌多以手术为主， 辅助以放化疗、 内分泌治疗和生物免疫治疗以及中医药个体化综合治疗。 常用临床治疗药物有化疗药蒽环 类、 紫杉类和环磷酰胺类， 内分泌治疗 药物他莫昔芬， HER ‑2靶向药物曲妥珠单抗、 拉帕替尼 等， 这些药物除具有显著的抗肿瘤作用外， 同时具有 许多不良反应， 蒽环类药物累积剂量超 过 300mg/m2时， 可引起心脏毒性， 使患者心力衰竭的风险随之增加； 内分泌治疗药物可导 致患者出现类似更年期综合征、 骨质疏松、 药物 性肝损伤等不良反应； 曲妥珠单抗不良反应 发生率≥5％， 主要表现在骨髓抑制、 肝肾毒性和神经毒性等方面。 因此， 进一步研究开 发高 效、 低毒， 具有靶向性的抗乳腺癌药物， 具有重要的科 学意义和研究价 值。 [0003]蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo  bufogargarizans  Cantor或黑眶蟾蜍Bufo   melanostictus Schneider的干燥分泌物。 其性温， 味辛， 有毒， 归心经， 具有解毒、 止痛、 开 窍醒神之功效， 用于治疗痈疽疔疮、 咽喉肿痛、 中暑神昏、 痧胀腹痛吐泻。 蟾酥单味药制成的 蟾酥注射液、 华蟾素注射液、 华蟾素胶囊和华蟾素片， 具有良好的抗肿瘤作用， 临床主要用 于治疗中、 晚期肿瘤， 尤其对原发性肝癌、 肺癌、 食管癌和胃癌具有较好的疗效， 并能增强机 体免疫力， 减少放化疗的毒副反应， 加强放化疗效果， 防止肿瘤治疗后复发与转移， 在减轻 癌症患者症状和痛苦、 提高生存质量、 延长寿命等。 现代药学研究表明， 蟾毒配基类成分是 蟾酥抗肿 瘤的主要药效物质， 2020年版 《中国药典》 (一部)中以华蟾酥毒基为参照， 采用一 测多评法测定药材中蟾毒灵、 华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量， 来评价蟾酥药材质量合格 与否。 [0004]蟾酥及其制剂不仅对原发性肝癌、 肺癌、 食管癌和胃癌有治疗作用， 而且对乳腺癌 有显著的抑制作用， 蟾酥注射剂(1.0 μg ·mL‑1)可显著抑制人乳腺癌细胞MCF ‑7和人前列腺 癌细胞DU145 中细胞周期蛋白 ‑D1(Cyc D1)、 mTOR下游底物S6蛋白激酶1(S6K1)和4E ‑BP1蛋 白的表达、 降低Rb蛋白磷酸化， 抑制mTOR ‑cyclin D1/Rb通路从而引起细胞G1期阻滞， 有效 抑制人乳腺癌细胞和人前列腺癌细胞的增殖。 但蟾酥相关制剂， 尤其是蟾酥注射液和华蟾 素注射液， 在临床使用中发现， 其主要成分华蟾酥毒基、 华蟾毒它灵和蟾毒它灵等成分稳定 性差， 制剂在 储藏期间易降解， 从而影响制剂中华蟾酥毒基、 华蟾毒它灵和蟾毒它灵等 成分 的含量， 对该 药物的临床使用有一定影响。说　明　书 1/11 页 3 CN 113876783 A 3