(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111154514.9 (22)申请日 2021.09.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113827724 A (43)申请公布日 2021.12.24 (73)专利权人 郑州大学 地址 450001 河南省郑州市科 学大道100号 郑州大学 (72)发明人 胡玉荣　周晨阳　马紫君　赵腾月　 李春明　宋成治　杨烨菲　饶志伟　 (74)专利代理 机构 西安铭泽知识产权代理事务 所(普通合伙) 61223 专利代理师 崔瑞迎 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 33/32(2006.01)A61K 33/26(2006.01) A61K 9/06(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/02(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 17/02(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (56)对比文件 CN 107496 377 A,2017.12.2 2 CN 111569073 A,2020.08.25 CN 105031671 A,2015.1 1.11 CN 110215439 A,2019.09.10 US 20201 14005 A1,2020.04.16 审查员 赵良 (54)发明名称 载药普鲁 士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶及制备 方法、 应用 (57)摘要 本发明属于生物医药领域， 提供了载药普鲁 士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶及制备方法、 应用， 对 介孔普鲁士蓝纳米粒子进行刻蚀形成中空普鲁 士蓝纳米粒子， 在中空普鲁士蓝纳米粒子上涂覆 上锰离子形成中空普鲁士蓝@锰纳米粒子， 对中 空普鲁士蓝@锰纳米粒子进行靶向修饰、 孔穴负 载声敏剂和包覆寡聚透明质酸， 最后在凝血酶的 刺激下与纤维蛋白原溶液混合形成 复合凝胶。 本 发明将新型声敏剂负载于中空普鲁士蓝纳米粒 子的孔穴中， 寡聚透明质酸修饰于外表面， 既可 以起到靶向作用， 还可调节肿瘤的免疫抑制性微 环境； 复合凝胶既可以实现对术后残留肿瘤组织 增强的声动力 ‑免疫协同治疗作用， 还可 以加速 术后创口 的修复与愈合。 权利要求书2页 说明书10页 附图2页 CN 113827724 B 2022.09.23 CN 113827724 B 1.载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 对介孔普鲁士蓝纳米粒子进行刻 蚀形成中空普鲁士蓝， 在所述中空普鲁 士蓝纳米粒子的外表面和内部介孔通道上涂覆上锰 离子形成中空普鲁士蓝@锰纳米粒子， 对所述中空普鲁士蓝@锰纳米粒子进行靶向修饰、 孔 穴负载声敏剂二氢卟吩和包覆寡聚透明质酸， 得到包覆寡聚透明质酸的中空普鲁士蓝@锰 纳米粒子， 在凝血酶的刺激下与含有所述包覆寡聚透明质酸的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子 的纤维蛋白原溶 液混合形成复合凝胶， 所述纳米粒子的粒径为6 0～300nm； 所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶的制备 方法， 包括以下步骤： 步骤1、 合成介孔普鲁士蓝纳米粒子： 称取 聚乙烯吡咯烷酮 ‑K30和铁氰化钾， 溶于HCl溶 液中， 室温搅拌至黄色澄清溶液； 在60～90℃下反应18～24h后离心洗涤、 干燥得到介孔普 鲁士蓝纳米粒子； 步骤2、 制备中空普鲁士蓝纳米粒子： 取步骤1中合成的介孔普鲁士蓝纳米粒子， 聚乙烯 吡咯烷酮 ‑K30依次加 入HCl溶液中， 室温进行搅拌2～3h转移到反应釜中， 在120～160℃下 反应2～4h后离心洗涤、 干燥得到中空普鲁士蓝纳米粒子； 步骤3、 制备中空普鲁士蓝@锰纳米粒子： 将二价锰盐、 柠檬酸钠、 聚乙烯吡咯烷酮或PEG 加入到中空普鲁士蓝纳米粒子溶液中搅拌2～3h， 搅拌加入铁氰化钾后继续搅拌2～3h， 室 温下老化12 ～36h， 离心洗涤、 干燥得到中空普鲁士蓝@锰纳米粒子； 步骤4、 靶向修饰： 取中空普鲁士蓝@锰纳米粒子、 氨基化组分置于超纯水中搅拌20～ 30h， 为混合溶液A； 取(3 ‑丙羧基)三苯基 溴化膦、 (1 ‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐 酸盐、 N‑羟基丁二酰亚胺， 加入二甲基亚砜中充分混匀、 溶解， 室温避光搅拌1～3h， 为混合 溶液B； 将溶液B加入溶液A中， 反应20～28h后避光透析22～26h除去游离的聚醚酰亚胺与 (3‑丙羧基)三苯基溴化膦， 洗涤离心得到靶向修饰的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子； 步骤5、 负载声敏剂： 将合成的靶向修饰的中空普鲁士蓝纳米粒子分散于无水乙醇或 DMSO中， 避光向溶液中加入声敏剂二氢 卟吩， 室温避光搅拌过夜， 离心洗涤得到负载声敏剂 的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子； 步骤6、 包覆寡聚透 明质酸： 取负载声敏剂的中空普鲁士蓝纳米粒子加入至寡聚透 明质 酸溶液中， 室温避光搅拌20～28h， 透析10～24h除去游离的寡聚透明质酸， 干燥得到包覆寡 聚透明质酸的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子； 步骤7、 取冻干纤维蛋白原置于37℃生理盐水溶液中， 配置浓度为10mg/mL的纤维蛋白 原溶液； 取冻干凝血酶置于氯化钙溶液中， 配置成终浓度为50U/mL的凝血酶溶液； 将包覆寡 聚透明质酸的中空普鲁 士蓝@锰纳米粒子 分散于纤维 蛋白原溶液中， 混合均匀； 然后 将凝血 酶溶液与之混合， 孵 育10～15mi n得到普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶。 2.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤1中， 聚 乙烯吡咯烷酮 ‑K30、 铁氰化钾 和HCl溶液的质量体积比为1.0～5.0g： 10～5 0mM： 20～40mL。 3.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤2中， 介 孔普鲁士蓝纳米粒子和聚乙烯吡咯烷酮 ‑K30的质量比为1～2:5～7， 介孔普鲁士蓝纳米粒 子和HCl溶液的质量体积比为1～ 2g： 1～2mL。 4.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤3中， 所 述二价锰盐为醋酸锰、 硫酸锰、 氯化锰或硝酸锰； 所述中空普鲁士蓝纳米粒子、 二价锰盐、 柠檬酸钠、 聚乙烯吡咯烷酮和铁氰化钾的质量权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113827724 B 2比为10:4:13:5 0:6； 或者， 所述中空普鲁士蓝纳米粒子、 二价锰盐、 柠檬酸钠、 PEG和铁氰化钾的质量比为 10:4:13:5 0:6。 5.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤4中， 氨 基化组分为聚醚 酰亚胺、 聚丙烯 胺基盐酸盐或聚酰胺 ‑胺型； 所述中空普鲁士蓝@锰纳米粒子与氨基化组分的质量比为5～8 :1～3； 所述(3‑丙羧基)三苯基溴化膦、 1 ‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N ‑羟 基丁二酰亚胺的质量比为5～7:2 9:6。 6.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤5中， 靶 向修饰的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子和无水乙醇的质量体积比为 1g:2mL； 或者， 靶向修饰的 中空普鲁士蓝@锰纳米粒子和DMSO的质量体积比1g:2mL； 所述靶向修饰的中空普鲁士蓝@锰纳米粒子与二氢卟吩的质量比为1～ 2:1～3。 7.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤6中， 所 述负载声敏剂的中空普鲁 士蓝@锰纳米粒子和寡聚透明质酸溶液的质量体积比为 1～3g:10 ～25mL。 8.根据权利要求1所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶， 其特征在于， 步骤7中， 所 述纤维蛋白原溶 液与凝血酶溶 液体积比为1:1～3 。 9.一种如权利要求1的所述载药普鲁士蓝@锰纤维蛋白复合凝胶在制备癌症术后治疗 药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 113827724 B 3