(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111185498.X (22)申请日 2021.10.12 (71)申请人 南京融捷康生物科技有限公司 地址 211800 江苏省南京市江北新区探 秘 路73号树屋十六栋07栋 (72)发明人 苏志鹏　张云　王乐飞　孟巾果　 (74)专利代理 机构 南京冠誉至恒知识产权代理 有限公司 32426 代理人 郭晓敏 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 16/40(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C12N 15/85(2006.01)C12N 1/21(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 针对EGFRvIII的单域抗体及其衍生蛋白和 应用 (57)摘要 本发明属于免疫学领域， 涉及针对EGF RvIII 的单域抗体及其衍生蛋白和应用。 所述的单域抗 体由重链构成， 重链包括重链CDR1、 重链CDR2和 重链CDR3； 所述的重链CDR1、 重链CDR2和重链 CDR3的氨基酸序列为 （1） — （7） 的序列组合或与 其同源性高的序列。 本发明使用生物基因工程技 术筛选出特异性针对EGF RvIII单域抗体， 这些抗 体初步亲和 力明显， 并且具有阻断特定细胞释放 细胞因子， 通过原核表达即具有良好的结合活 性， 具有一定的成药性。 权利要求书2页 说明书13页 序列表16页 附图5页 CN 114044826 A 2022.02.15 CN 114044826 A 1.针对EGFRvIII的单域抗体， 其特征在于： 所述的单域抗体由重链构成， 重链包括重链 CDR1、 重链CDR2和重链CDR3； 所述的重链CDR 1、 重链CDR2和重链CDR3的氨基酸序列为下述 （1） ‑（7） 的一种： （1） SEQ ID NO:40所示的CDR 1， SEQ ID NO:46所示的CDR2， SEQ  ID NO:52所示的CDR3； （2） SEQ ID NO:40所示的CDR 1， SEQ ID NO:46所示的CDR2， SEQ  ID NO:53所示的CDR3； （3） SEQ ID NO:41所示的CDR 1， SEQ ID NO:48所示的CDR2， SEQ  ID NO:54所示的CDR3； （4） SEQ ID NO:43所示的CDR 1， SEQ ID NO:49所示的CDR2， SEQ  ID NO:51所示的CDR3； （5） SEQ ID NO:40所示的CDR 1， SEQ ID NO:47所示的CDR2， SEQ  ID NO:52所示的CDR3； （6） SEQ ID NO:40所示的CDR 1， SEQ ID NO:44所示的CDR2， SEQ  ID NO:52所示的CDR3； （7） SEQ ID NO:42所示的CDR 1， SEQ ID NO:45所示的CDR2， SEQ  ID NO:50所示的CDR3 。 2.根据权利 要求1所述的针对EGFRvIII的单域抗体， 其特征在于： 所述的单域抗体的框 架区FR的序列为下述 （a） ‑（i） 中的一种； （a） SEQ ID NO:21所示的FR1， SEQ  ID NO:26所示的FR2， SEQ  ID NO:34所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （b） SEQ ID NO:24所示的FR1， SEQ  ID NO:31所示的FR2， SEQ  ID NO:37所示的FR3， SEQ   ID NO:38所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （c） SEQ ID NO:25所示的FR1， SEQ  ID NO:30所示的FR2， SEQ  ID NO:36所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （d） SEQ ID NO:23所示的FR1， SEQ  ID NO:27所示的FR2， SEQ  ID NO:32所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （e） SEQ ID NO:21所示的FR1， SEQ  ID NO:28所示的FR2， SEQ  ID NO:34所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （f） SEQ ID NO:21所示的FR1， SEQ  ID NO:27所示的FR2， SEQ  ID NO:34所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （g） SEQ ID NO:23所示的FR1， SEQ  ID NO:27所示的FR2， SEQ  ID NO:33所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换 （h） SEQ ID NO:22所示的FR1， SEQ  ID NO:26所示的FR2， SEQ  ID NO:34所示的FR3， SEQ   ID NO:39所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换； （i） SEQ ID NO:22所示的FR1， SEQ  ID NO:29所示的FR2， SEQ  ID NO:35所示的FR3， SEQ   ID NO:38所示的FR4， 或其变 体， 所述变 体在所述FR中包 含至多3个氨基酸的替换。 3. 根据权利要求1所述的针对EGFRvIII的单域抗体， 其特征在于： 所述针对EGFRvIII 的单域抗体与选自SEQ  ID NO： 1‑10的氨基酸序列具有至少95％序列同源性， 并且能够特异 性结合EGFRvI II抗原。 4. 针对EGFRvIII的单域抗体， 其特征在于： 所述单域抗体分别如SEQ  ID NO.1‑10所 示， 或者所述单域 抗体与SEQ  ID NO.1‑10的氨基酸序列具有至少95％序列同源性。 5. 根据权利要求4所述的针对EGFRvIII的单域抗体， 其特征在于： 所述单域抗体的编 码序列分别如SEQ  ID NO.11‑20所示， 或者与SEQ  ID NO.11‑20具有至少95％序列同源性。 6.权利要求1 ‑5任意一项所述的针对EGFRvIII的单域抗体的Fc融合抗体或人源化抗 体。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114044826 A 27. 一种编码权利要求1 ‑5任意一项所述的针对EGFRvIII单域抗体的核苷酸分子， 其特 征在于： 其核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 11‑20所示， 或者与SEQ  ID NO.11‑20具有至少 95％序列同源性。 8.一种表达载体， 其特征在于， 其包含编码权利要求1 ‑5任意一项所述的单域抗体或者 权利要求6所述的Fc融合 抗体的核苷酸分子或者权利要求7 所述的核苷酸分子 。 9.一种宿主细胞， 其特征在于， 其可以表达出权利要求1 ‑5任意一项所述的针对 EGFRvIII的单域抗体， 或其包 含权利要求8所述的表达载体。 10.权利要求1 ‑5任意一项所述的针对EGFRvIII的单域抗体在制备对表面含有 EGFRvIII蛋白的细胞进行内化的试剂中的应用； 或者， 权利要求1 ‑5任意一项所述的针对 EGFRvIII的单域抗体在制备抑制EGFRvI II基因表达的药物或抗肿瘤药物中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114044826 A 3