(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111191313.6 (22)申请日 2021.10.13 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113908292 A (43)申请公布日 2022.01.11 (73)专利权人 南京吉迈生物技 术有限公司 地址 210061 江苏省南京市高新 技术产业 开发区高新路28号 (72)发明人 闫旭　孙晶　黄新宇　郝肖瑶　 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/64(2017.01) A61K 31/7088(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) 审查员 张珮明 (54)发明名称 靶向物介导的核酸纳米制剂及其制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种靶向物介导的核酸纳米制 剂及其制备方法。 本发明特别涉及一种转铁蛋白 (Tf)介导的L NP(Tf‑LNP)及其制备方法和应用。 权利要求书1页 说明书15页 附图7页 CN 113908292 B 2022.08.16 CN 113908292 B 1.一种制备靶向物介导的脂质纳米颗粒的方法， 包括以下步骤： 将靶向物修饰的聚合物缀合脂质Tf ‑PEG2k‑DMG溶于二 甲亚砜、 N,N ‑二甲基甲酰胺、 1, 4‑二氧六环或N‑甲基吡咯烷酮中， 即为溶 液A； 将可离子化阳离子脂质Dlin ‑MC3‑DMA或SM‑102、 中性脂质DSPC、 胆固醇或其类似物β ‑ 谷甾醇、 粪甾醇、 麦角甾醇、 菜油甾醇、 豆甾醇、 菜籽甾醇、 番茄碱、 熊果酸或α ‑生育酚， 和聚 合物缀合脂质PEG2k ‑DMG溶于乙醇中， 即为溶 液B； 将所述溶液A加入所述溶液B中进行混合， 即为溶液C， 其中各脂质成分的摩尔百分比分 别为： Dlin ‑MC3‑DMA或SM‑102为50‑65%、 DSPC为3 ‑15%、 胆固醇或其类似物为30 ‑40%、 PEG2k ‑ DMG为0.5 ‑2%、 Tf‑PEG2k‑DMG为0.0 01‑1%； 将核酸mRNA溶于pH 3.0‑5.0的苹果 酸、 柠檬酸或醋酸缓冲液中， 即为溶 液D； 将所述溶液C与所述溶液D以体积比1:3的比例 在微流控芯片中混合即为溶液E， 其中核 酸mRNA的量占Dl in‑MC3‑DMA或SM‑102的2%至10%质量百分比； 将所述溶液E在pH=7.4  PBS或pH=8.0  Tris缓冲液中透析、 去除乙醇得到靶向物介导的 脂质纳米颗粒。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中所述pH=7.4  PBS或pH=8.0  Tris缓冲液中含有冷冻 保护剂甘油、 海藻糖或蔗糖。 3.根据权利要求2所述的方法， 其中所述冻干保护剂为含有5 ‑8%质量浓度的蔗糖。 4.权利要求1 ‑3任一所述方法制备得到的靶向物介导的脂质纳米颗粒在制备药物中的 应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113908292 B 2靶向物介导 的核酸纳米制剂及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于核酸药物递送技 术领域。 背景技术 [0002]癌症是一类常年困扰人们的病症。 常规化药治疗往往具有毒副作用大、 容易产生 耐药性、 存在无法靶标位 点等缺点。 [0003]近年来通过核酸药物治疗癌症取得了较大进展。 核酸药物包括反义核苷酸、 小干 扰RNA、 质粒DNA、 信使RNA、 CRISPR/Cas9等。 核酸分子由于其较高的负电荷密度和亲水性， 通 常难以被细胞有效的摄取， 因此核酸药物对递送载体具有较强的依赖性。 目前已有多种核 酸药物及其递送载体进入临床实验阶段， 包括脂质复合物(LPX)、 腺相关病毒(AAV)、 腺病毒 (AdV)、 脂质纳米颗粒(L NP)、 聚合物载体等。 [0004]对于核酸药物的递送， 通常需要关注如下方面： (1)转染效率。 递送载体不仅需要 能够被肿瘤细胞快速摄取， 还要能够实现内涵体逃逸， 将核酸药物释放至细胞质或细胞核。 (2)粒径和粒径分布。 在较理想的情况下， 递送载体的粒径应不大于150nm， PDI不高于0.2， 这样核酸药物制剂能够更好地在血管、 淋巴管、 毛细血管、 细胞间质等空间内转运， 更有效 地将药物递送至目标细胞。 (3)免疫原 性。 载体本身通常不应对生物体的免疫系统有显著的 激活效应， 因为这些内源性免疫反应会增强生物体对核酸药物制剂的清除、 降低转 染效率， 并可能产生程度不等的不良反应。 (4)包封率。 即排除游离核酸药物后， 有多少核酸药物是 被牢固装载在递送载体内部的。 包封率较低的制剂不仅会浪费核酸药物、 提高生产成本， 同 时游离核酸药物也更容易激活生物体的免疫系统， 进一步降低药效、 增加安全性风险。 (5) 药代动力学研究。 需要明确载体的给药途径、 体内循环 时间、 各脏器富集效率、 目标细胞群 转染效率等， 从而评估递送载体与适应症是否匹配。 同时， 一些递送载体由于代谢速率较 慢， 长期多次给 药是否会产生累计毒性 也是值得关注的。 [0005]与其他类型的载体相比， LNP在上述多个方面具有较显著的优势： (1)可离子化脂 质一方面在生理条件下近中性， 降低了阳离子材料带来的潜在毒性； 同时能够在细胞内的 低pH条件 下通过膜融合机制破坏内涵体、 提高转染效率； (2)通过微流控设备制备， LNP的粒 径、 粒径分布和包封率均能够实现较好的质量控制； (3)作为 非病毒类载体， LNP在降低免疫 原性方面有较大优势； (4)通过控制给药途径、 剂量、 频次， LNP可分别以肝脏、 淋巴结、 肿 瘤 等组织作为治疗靶点。 然而， LNP的递送通常不具有明确的器官/细胞选择性， 可能存在 靶向 性差、 对目标细胞转染效率差等原因进而造成较强的不良反应及不稳定的药效等结果， 限 制了LNP在包括肿瘤治疗在内的某些适应症方面的应用。 因此， 在LNP粒子表面修饰肿瘤细 胞特异性的靶向物， 可以显著 提高LNP在特定肿瘤细胞系的摄取效率、 降低由于脱靶效应带 来的不良反应。 [0006]靶向物， 例如转铁蛋白(Transferrin,Tf)， 是和生物体内铁元素转运、 代 谢密切相 关的一种蛋白。 Tf的分子量约为77kDa， 在人体内可以脱铁形式(apo ‑Tf)或含铁形式(holo ‑ Tf)存在， holo ‑Tf通常结合有2 个铁原子。 Tf的细胞表面受体为转铁蛋白受体(Transferrin  说　明　书 1/15 页 3 CN 113908292 B 3