ICS 65.020.20 B 05 运 城 市 地 方 标 准 DB 1408/T 025—2022 香菇栽培种生产技术规程 2022 - 03 - 30 发布 运城市市场监督管理局 2022 - 05 - 01 实施 发 布 DB 1408/T 025—2022 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 3.1 固体培养基 .................................................................... 1 4 生产流程 .......................................................................... 1 5 生产要求 .......................................................................... 1 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 6 场地选择 ...................................................................... 环境要求 ...................................................................... 厂区布局与厂房设置 ............................................................ 生产设备与设施 ................................................................ 人员要求 ...................................................................... 1 2 2 2 2 生产原料与菌种 .................................................................... 2 6.1 生产原料 ...................................................................... 2 6.2 菌种与种源确定 ................................................................ 2 7 生产技术与操作规程 ................................................................ 2 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 培养基配制与分装 .............................................................. 培养基灭菌 .................................................................... 接种 .......................................................................... 培养 .......................................................................... 成品检验 ...................................................................... 入库管理 ...................................................................... 2 3 3 4 4 4 附录 A（规范性附录） 生产条件与设备 .................................................. 5 I DB 1408/T 025—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由运城市农业农村局提出并监督实施。 本文件由运城市农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山西农业大学山西功能食品研究院、运城市农业农村局。 本文件主要起草人：张程、凌亮、屈会玲、曹新武、郭尚、杨杰、王晓华、梁盼。 II DB 1408/T 025—2022 香菇栽培种生产技术规程 1 范围 本文件规定了香菇栽培种（固体菌种）生产相关的术语和定义、生产流程、生产要求、生产原料与 菌种、生产技术与操作规程的要求。 本文件适用于运城市范围内香菇栽培种（固体菌种）的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 12728 食用菌术语 GB 19170 香菇菌种 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 固体培养基 以富含木质纤维素或淀粉类天然物质为主要原料（运城地区一般以果木屑为主要原料），添加适当 数量的有机氮源和无机盐类原料，具有一定水分含量的培养基质。 4 生产流程 生产场地选择→厂区布局与厂房设置→设备与设施→生产原料与菌种→培养基制备→分装→灭菌 →冷却→接种→培养（检验）→成品检验→入库管理。 5 生产要求 5.1 场地选择 应选择地势高、干燥、通风良好、排水畅通、交通方便的场地。 1 DB 1408/T 025—2022 5.2 环境要求 环境要求应符合NY/T 1731的要求。 5.3 厂区布局与厂房设置 厂区布局与厂房设置按附录表A.1执行。 5.4 生产设备与设施 生产设备与设施按附录表A.2执行。 5.5 人员要求 应配备能掌握菌种生产相关知识技能的专业技术员及检验人员。 6 生产原料与菌种 6.1 生产原料 生产原料应符合 NY/T 528 的要求。原料主要是农作物谷粒及农副产品的废弃下脚料，如木屑（果 木屑）、麸皮、棉籽壳等，还有其他生物制剂如酵母粉、蛋白胨等。另外还应添加一些化学药品如硫酸 镁、磷酸二氢钾等。 6.2 菌种与种源确定 6.2.1 菌种的引种来源应确实可靠，母种的感官要求和生物学要求应符合 GB/T 19170 的要求。 6.2.2 栽培种生产单位每年在种源进入扩大生产程序之前，应进行菌种质量和种性的检验，检验项目 应包括纯度、活力、菌丝长势的一致性、菌丝生长速度和菌落外观等，并做出菇试验，验证种性。种源 出菇试验方法及种源质量要求应符合 NY/T 1742 的要求。 7 生产技术与操作规程 7.1 培养基配制与分装 7.1.1 母种培养基 一般应使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，并严格控制pH值。 7.1.2 原种与栽培种培养基 应选用以下的培养基配方： a) 阔叶硬杂木屑（果木屑）78%，麸皮 20%，蔗糖 1%，石膏 1%，含水量 60%±1%，pH 6.5； b) 阔叶硬杂木屑（果木屑）70%，棉籽壳 13%，麦麸 15%，蔗糖 1%，石膏 1%，含水量 60%±1%， pH 6.5； c) 阔叶硬杂木屑（果木屑）63%，棉籽壳 20%，麸皮 15%，蔗糖 1%，石膏 1%，含水量 60%±1%， pH 6.5。 7.1.3 培养基分装 2 DB 1408/T 025—2022 a) b) 母种培养基的分装量应掌握在试管长度的四分之一至五分之一处，灭菌后摆放成的斜面顶端距 试管口应不少于 50mm； 原种和栽培种培养基应装至距瓶(袋)口不少于 50mm，灭菌后应不少于 45mm。 7.2 培养基灭菌 7.2.1 灭菌 香菇的菌种培养基灭菌应使用高压灭菌： a) 母种的培养基配制分装后应立即灭菌，母种培养基灭菌 0.11MPa～0.12MPa，30min； b) 原种和栽培种培养基配制后应在 4h 内灭菌，原种和栽培种培养基灭菌 0.14MPa～0.15MPa， 2.5h。 7.2.2 冷却 冷却室在使用前应进行清洁和消毒处理。将灭菌后的栽培种放置在冷却室中自然冷却到料温降至适 宜温度。 7.2.3 灭菌效果检查 灭菌后应进行灭菌效果检查。 a) 母种培养基可直接放入 28℃恒温培养； b) 原种和栽培种培养基随机抽取 1%作为样品，选取其中的基质颗粒接入无菌 PDA 培养基中，置 于 28℃恒温培养； c) 恒温培养 48h 后应检查有无微生物长出，并判断培养基灭菌是否合格。 7.3 接种 7.3.1 接种室(箱)的清洁灭菌处理 7.3.1.1 接种室应为接种专用，室内要求清洁无菌。在搬入接种物和被接种物前应先进行卫生清洁处 理，再进行消毒处理。 7.3.1.2 接种室（箱）药物消毒处理可选用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸（每平方米一般应使用 40%甲醛 10mL、高锰酸钾 8mL，时间应不低于 20min）。喷雾灭菌处理可用 0.1%氯化汞或 5%苯酚溶液。 7.3.1.3 接种超净台（接种箱）应先用 75%酒精进行表面擦拭消毒，再用紫外灯照射预净 20min。 7.3.2 接种物的灭菌 接种用培养基可以先放入培养室与培养室一起消毒灭菌。菌种放入超净台时，应用75%酒精进行表 面擦拭消毒灭菌。 7.3.3 接种操作 在无菌室(箱)或净化工作台上应严格按无菌操作接种。 a) 接种的品种应单品种操作，中间不得更换品种。应一个品种操作完成后，再换另一品种； b) 母种、原种、栽培种