ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3035—2023 向日葵抗黑 斑病水平室内鉴定技术规程 Technical code of practice for indoor identification of sunflower resistance to black spot 2023-05-11发布 2023-06-11实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3035 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（ SAM/TC 20 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古自治区农牧业科学 院、内蒙古自治区农业标准化技术委员会。 本文件主要起草人：张文兵、赵素梅、张键、路妍、韩升才、苏雅杰、融晓君、张智芳、高红宇、 仇凯、段钧雷、贺琪、朝鲁、白佳琦、张之为、孔祥久、贾硕、刘雪英。 DB15/T 3035 —2023 1 向日葵抗黑斑病水平室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了室内向日葵黑斑病抗性鉴定方法和抗病性评价标准。 本文件适用于室内抗向日葵黑斑病品种鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 向日葵黑斑病 sunflower black spot 由向日葵链格孢（ Alternaria helianthi ）引起向日葵真菌病害。 注： 向日葵黑斑病症状见附录 A。 4 病原菌制备 菌株选择 根据所鉴定品种推广应用区域选择能代表该区域病原菌致病力水平的优势菌株。 培养基 PDA培养基。 病原菌培养 将向日葵黑斑病菌在 PDA平板活化 5 d～7 d后，从菌落边缘挑取菌块接入麦麸培养基（麦麸，加入 适量的水，装入小罐头瓶，高压湿热灭菌 30 min，冷却到室温备用），用于快速扩繁大量的分生孢子。 25±2 ℃培养，菌丝长满罐头瓶后用清水冲洗麦麸培养基， 4层纱布过滤获得分生孢子液。血球计数板 计数，将分生孢子液的浓度调至 1×105个/mL后备用。 5 向日葵黑斑病抗性鉴定 对照品种 以龙食葵 11号作为感病对照品种。 DB15/T 3035 —2023 2 向日葵种植 将向日葵种子播种在装有无菌土 13 cm×13 cm的营养钵中，每个品种播种 5钵，每钵播种 5粒，25℃ ±2 ℃，16 h光照/8 h黑暗条件下培养，待向日葵有 4片真叶时开始进行喷雾接种。 接种方法 将黑斑病菌体配成孢子浓度为 1×105 孢子/ mL的悬浮液。采用喷雾法接种 10 mL孢子液于向日葵叶 片上，25 ℃±2 ℃条件下，黑暗保湿 24 h，后置于 25 ℃±2 ℃，16 h光照/8 h黑暗条件下培养， 8 d 后进行观察。每个处理 15株幼苗， 3次重复。 病害调查及病情指数计算 根据向日葵的发病程度，分为 0、1、3、5、7、9级共6个级别，其分级标准如下： a) 0级：无病症； b) 1级：褐色、圆形小的散状斑点占总叶面积的 1%； c) 3级：圆形变褐斑占总叶面积的 1%～10%，下层叶片被侵染； d) 5级：圆形变褐斑占总叶面积的 11%～25%，植物一半的叶片被侵染； e) 7级：圆形变褐斑连接聚集，占总叶面积的 26%～50%，植物2～3叶片被侵染； f) 9级：暗褐色斑点聚集，侵染超过总叶面积 50%，几乎所有叶片被侵染。 根据各向日葵品种接种后的发病级别，按照下面的公式（ 1）计算病情指数。 DI=[Σ(A×B)／C×9] ×100 ………………………………（ 1） 式中： DI ——病情指数； A ——各级病叶数； B ——相对级数值； C ——调查总叶数。 抗性级别划分 向日葵黑斑病抗性水平抗病性鉴定以病情指数为基础，利用下面的公式（ 2）计算相对抗性指数， 通过相对抗性指数进行划分，划分标准见表 1。 K=DIy/Dick X=1 -K ……………………………………（ 2） 式中： K ——相对病情指数； DIy ——鉴定品种平均病情指数； Dick ——对照品种平均病情指数； X ——相对抗性指数。 DB15/T 3035 —2023 3 表1 向日葵黑斑病抗性水平划分标准 抗病型 相对抗性指数 免疫（I） X = 1 高抗（HR） 0.8≤ X＜1 中抗（MR） 0.6≤ X ＜0.8 中感（MS） 0.3≤ X ＜0.6 高感（HS） X ＜0.3 DB15/T 3035 —2023 4 A A 附录 A （资料性） 向日葵黑斑病症状 向日葵黑斑病可危害叶片、 叶柄、 茎和花瓣， 尤以危害叶片为主。 叶片发病初期， 病斑为褐色斑点， 逐渐扩大呈圆形，病斑暗褐色且中心灰白，边缘有黄绿色晕圈，直径 5 mm～20 mm，相邻病斑易扩大汇 合（见图 A.1）；叶柄、茎部染病后病斑黑褐色，圆形、椭圆形或梭形（见图 A.2），由下向上蔓延，天 气潮湿时病斑上生出一层淡褐色霉状物， 为菌的分生孢子梗及分生孢子。 病情严重时， 叶柄上布满病斑， 叶片上病斑联合成片，叶柄和叶片一起干枯。茎部病斑最长可达 140 mm，病斑连结成片，染病后期茎秆 全部变成褐色。花托感病形成圆形病斑，稍凹陷。花瓣染病，病斑椭圆形或梭形，褐色，中央灰白色， 具同心轮纹， 病斑扩展使花瓣枯死。 葵盘染病后病斑圆形或梭形， 具同心轮纹， 褐色、 灰褐色或银灰色， 中心灰白色（见图 A.3），病斑扩大汇合，全葵盘呈褐色，病斑上长一层灰褐色霉状物。病原菌还可以 侵染向日葵的种子，被侵染的种子出现棕黑色斑点，发芽率降低，播种后种苗出现症状。 图A.1 向日葵黑斑病叶部症状 图A.2 向日葵黑斑病叶柄症状（左）和茎病症状（右）