ICS 65.150 B 51 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 2082—2018 坛紫菜 Pyropia haitanensis 行业标准信息服务平台 2018-12-19发布 2019-06-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 SC/T 2082—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会（SAC/TC156/SC2）归口。 本标准起草单位：福建省水产技术推广总站、集美大学。 本标准主要起草人：黄健、刘燕飞、谢潮添、陈燕婷、宋武林、纪德华、徐燕、翁祖桐、陈曦飞、陈昌生。 行业标准信息服务平台 SC/T 2082—2018 坛紫菜 1范围 本标准给出了坛紫菜[Pyropiahaitanensis（ChangctZhang）196o］的学名与分类、主要形态特征、 繁殖特性、细胞遗传学特性、分子遗传学特性、检测方法及判定规则 本标准适用于坛紫菜的种质检测与鉴定 2 规范性引用文件 件。凡是不注日期的引用文件 SC/T2064坛紫 菜种 藻和苗种 A 3学名与分类 S 3.1学名 坛紫菜［Pyropial haitaner CChang A 3.2分类 藻纳（Rhodophyceac） ）、紫菜 属(Pyropia)。 主要形态特征 4 4.1叶状体 叶状体呈薄膜状 形或针形 型或长亚卵形，边缘 无皱裙 形态为披针 稍有皱褶， 边缘细胞具有锯齿， 见图1 ）。自基部细胞向下 伸的假 丝固着在生 粮 长基质上。暗绿色带褐色或红褐色 般体高为12cm=18cm室内培养 工栽培的可 达2m以上。叶状体多为单层细胞结构，仅局部为两悬细胞 细胞内全 星状素体，位居中。叶状 人工栽境的经多次 剪收可达100m以 体厚度一般为18μm~70pm， 服务平台 图1坛紫菜叶状体 1 SC/T2082—2018 4.2丝状体 从叶片上放散出来的果孢子遇到含碳酸钙的基质如贝壳等就钻人萌发，形成藻落。丝状体在无附 着基质的人工培养条件下，可悬浮生长于海水中，形成藻落或藻球，成为游离丝状体（自由丝状体）。丝 状体的生长从果孢子萌发开始，经历营养藻丝生长、孢子囊枝生长、壳孢子形成和放散3个时期（见图 2），每一个时期随着生长发育形态也有相应的变化。 a）营养藻丝 b孢子囊枝 c）壳孢子形成和放散 图2坛紫菜丝状体 5繁殖特性 坛紫菜为异型世代交替生活史（见图3），叶状体大型为单倍体，丝状体微型为二倍体。叶状体多数 为雌雄异株，少数雌雄同株。雌雄同株时果孢子囊群和精子囊器常以直线或曲线分别集中区分于叶状 体的一定区域上，有的精子囊器和果孢子囊分布在叶状体的上下对半等分。精子囊母细胞为雄性生殖 细胞，经多次分裂形成精子囊器。每个精子囊器具有128个或256个精子囊，分裂式为含AB,Cg或含 AB，C16；果胞为雌性生殖细胞，果胞受精后分裂形成果孢子囊，成熟的果孢子囊内含16个或32个果孢 子，分裂式为早A,BzC或早AzB,C。果孢子逸出萌发形成丝状体。丝状体经营养藻丝生长，发育成孢 子囊枝，成熟分裂形成壳孢子囊，放散出壳孢子，壳孢子萌发时进行的第1次和第2次细胞分裂为减数 分裂，进一步萌发成叶状体。 &o 5 6 7 10 12 说明： 一叶状体； 8 丝状藻丝； 果孢（横切面）； 孢子囊枝； 精子囊器（横切面）； 10 壳孢子囊形成与壳孢子放散； 精子； 11- 壳孢子； 4- 12- 四细胞叶状体； 5 受精卵； 6 果孢子囊； 叶状体幼苗。 果孢子； 7- 图3坛紫菜生活史 2 SC/T2082—2018 6细胞遗传学特性 叶状体的细胞为单倍核相，染色体n=5，丝状体的细胞为双倍核相，染色体2n=10（见图4)。 a）丝状体细胞（2n=10) b）叶状体细胞（n=5) 图4坛紫菜染色体 7分子遗传学特性 7.15.8S核苷酸序列 坛紫菜5.8S核苷酸序列总长度为160bp，序列如下： 1 GATACAACTC TTAGCGGTGG ATATCTTGGC TCTCGCAACG ATGAAGAACG CAGCTAACTG 61 CGATAACTAA TGTGAATTGC AGGACTTCGT GAATCATTGA GTCTTTGAAC GCAAGTTGCG 121 CTCATGTCCG GGTGGATGTG AGCATGCCTG TTTGAGTGTC 7.2 rbcS-ISR(ribulose - 1,5 - bisphosphate carboxylase/ oxygenase small subunit intergenic spacer re gion)核苷酸序列 坛紫菜rbcS-ISR核苷酸序列总长度516bp，序列如下： 61 TAAGTAGAAT TGACTTATAA CAATAACGAG CATAGAATAG TGAGAGTAAC ACAAGGGACC 3O1 ATTAGTTCAT GCAGAAAAGC AAAACCTAAT TATTATATTA AAGTTAATGC TTTTGATAAT 361 ACTCGAGGTA TTGAAAGTTG TGTACTATCT TTTATTGTAA ATAGACCTAT TAACGAGCCA 481 TATGCTACTG AAAAGCCTGA AGGAGCTAGA TATTAA 8检测方法 8.1抽样方法 按SC/T2064的规定执行。 8.2主要形态特征检测 8.2.1叶状体 3 SC/T2082—2018 按4.1的规定采用目视法和显微镜检测。 8.2.2丝状体 按4.2的规定采用显微镜检测。 8.3染色体检测 见附录A。 8.4DNA片段序列检测 8.4.1坛紫菜DNA提取 参见附录B。 8.4.2序列扩增引物 PUBLI 8.4.2.15.8S核苷酸序列扩增引物 正向引物：5'-GGGATCCGTTTRCTAGG 反向引物：5'-GGGATCCATHT AGC 8.4.2.2rbcS-ISR核苷酸序列扩 增弓 GACTCCA 正向引物：5 ACAGC AACATCTAG 3元 TAATA 反向引物 SCTAGOTCE S 8.4.3PCR扩增 PCR扩增反 立体系为 CRBulferlong模板 mmol /LMg2+,1.5 江含 nmol/1/物.200mol U Taq DNA 酶-200 dNT.最后添加无菌dd 总体积为25μL。 4@变性1mim.55℃ 延伸2min， PCR 扩 体程序 94预变 胜7min每个 循环 共进行35个 循 8.4.4DNA序 列测定 参见附录 CUL 9判定规则 以第4章 章为 和rbcS-ISR核 符合工述质量 要求的 苷酸序列K2P遗 品为合格样品。 服务平台 4 SC/T 2082—2018 附录A （规范性附录） 染色体检测 A.1染色液的配制 A.1.1储存液 4g苏沐精和1g铁矾结晶，溶于100mL的45%的醋酸溶液。 A.1.2染色液 每5mL的储存液中加入2g水合三氯乙醛，充分溶解摇匀，存放一天后使用。染色液只能保存一 个月，在两周内使用效果最好。 A.2染色体检测 取分裂旺盛时的组织或细胞，遮光处理后3h内，每间隔30min用卡诺氏固定液（无水乙醇：冰乙 酸=3：1)固定1次样品，24h后移至明亮处放置，直至固定的材料变成无色。将少量经过褪色处理的 组织或细胞，在4℃的蒸馏水中软化5s～10s，吸干水分后置于载玻片上，滴加染色液，染色时间根据材 料不同控制在5min～10min。盖好盖玻片，于火焰上稍加热，使用橡皮进行轻微的压片。制好的片子 不能及时进行观察可用石蜡封片。置于显微镜下观察和拍摄照片，先用低倍镜（10×10）调焦，找到具有 分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10X40）下观察。 行业标准信息服务平台 5