ICS 65.150 B 51 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC 2018—2004 红鳍东方 Tiger puffer 行业标准信息服务平台 2004-04-16 发布 2004-06-01实施 中华人民共和国农业部 阝发布 SC 2018—2004 前言 本标准的第4章、第6章为强制性的,其余为推荐性的。 本标准的附录 A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学。 岩、柳学周、孙中之。 本标准主要起草人：陈四清、于东祥、孔晓瑜、马爱军、张 行业标准信息服务平台 1 SC 2018—2004 红鳍东方 1 范围 本标准给出了红鳍东方（Takifugurubripes，Temminck&Schlegel）的主要形态构造特征、生 长与繁殖、遗传学特征以及检测方法。 本标准适用于红鳍东方的种质鉴定与检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 17716 青鱼 GB/T18654.12养殖鱼类种质检测第12部分：染色体组型分析 3名称与分类 3.1学名 红鳍东方（Takifugu rubripes，Temminck & Schlegel)。 3.2分类位置 红鳍东方属硬骨鱼纲（Osteichthyes），形目（Tetraodontiformes），亚目（Tetraodontoidei）， 科（Tetraodontidae)，东方属（Takifugu）。 4主要形态构造特征 4.1形态 红鳍东方体粗短，近圆筒形，头部宽圆，吻圆钝，唇发达，尾柄短小；体背面呈青黑色，体色 与花纹比较稳定，胸鳍后上方具一白边黑色大斑，臀鳍白色，充血后呈淡红色，其他鳍呈黑色。头部 及体背、腹面均被强刺，背刺区与腹刺区分离。额骨长与宽约相等；额骨纵走隆起线向前延伸，达前 额骨后缘中部；前额骨占眶上缘的1/3。吻长为眼径的3.2倍～3.8倍。眼小、上侧位，眼间隔宽而 微突，鼻孔每侧2个，上、下颌缝显著，上、下颌各有2个板状齿，背鳍后位与臀鳍相对称，且相 似，均无鳍棘。背侧无弓形暗色横斑纹。在体侧眼状大斑的后方，尚有较小的黑斑若干。头及背部宽 圆形，无第一背鳍及腹鳍，第二背鳍与臀鳍相似，尾鳍截形。气囊发达。红鳍东方外形见图1。 图1红鳍东方外形 4.2可数性状 SC 2018—2004 4.2.1背鳍鳍条 16个～19个。 4.2.2臀鳍鳍条 13个～16个。 4.2.3胸鳍鳍条 15个～18个。 4.2.4尾鳍鳍条 10个。 4.3可量形状 红鳍东方实测可量性状比例值见表1。 表 1 红鳍东方实测可量性状比例值 全长/体长 体长/体高 体长/头长 头长/吻长 头长/眼径 |头长/眼间距|体长/尾柄长 尾柄长/尾柄高 1.2~1.4 3.2~3.8 3.0~3.4 2.0~2.5 7.3~8.8 1.8~2.1 4.8~5.2 1.6~2.0 4.4内部构造特征 4.4.1齿 上、下颌缝显著，上、下颌各有2个板状齿。 4.4.2脊椎骨 脊椎骨21个～22个。 5生长与繁殖 5.1生长 年龄与体长的关系见表2。 表2红鳍东方各年龄组体长与体重的实测平均值 年龄，龄 1 2 3 4 5 6 8 32 ~ 46~ 54 ~ 24~ 41~ 51~ 59 ~ 62 ~ 体长，cm 25 35 43 48 52 56 61 65 480~ 1 100 ~ 2 200 ~ 3 200 ~ 4 800~ 5 700 ~ 7 400~ 8 600 ~ 体重，g 550 9 900 1 500 2 800 4 000 5 100 6 300 8 200 注：鱼龄主要依据脊椎骨切片上的年轮数确定。 红鳍东方体长与体重关系式见附录A。 5.2繁殖 5.2.1生物学最小型 雌鱼体长为36cm，体重为1500g；雄鱼体长为35cm，体重为1200g。 5.2.2性成熟年龄 息服务 在自然海区，雌、雄性性成熟年龄均为3龄。 5.2.3产卵特点 红鳍东方为一次产卵型鱼类。怀卵量范围为20×104粒～250×104粒。3kg以下的小型亲鱼产 卵量为20×104粒～30×104粒，6kg～7kg的大型亲鱼产卵量为150×104粒200×104粒。自然海 区产卵期因地域而异，东海、黄海区为3月下旬至6月上旬，产卵水温为16℃～19℃，产卵场所为 2 SC 2018-2004 水深20m的沙质海底。 5.2.4卵子特征 卵子淡黄色，不透明，圆球形，多油球，比重略大于自然海水；沉性黏着，卵膜厚，表面有不规 则的波状裂纹，卵径1.1mm→1.4mm，每克卵600粒~700粒。 6 遗传学特性 6.10细胞遗传学特性 6.1.1染色体数 体细胞染色体数目为：2n=44。 6:1.2核型 核型公式：2n=12m+6sm+26t；染色体总臂数NF=62。 22对染色体中，中部着丝点染色体（m）6对，亚中部着丝点染色体（sm）3对，端部着丝点染 色体（t）13对；未发现具次缢痕染色体；也未发现有异形性染色体存在。染色体核型见图2。 美城 m 5μm 图2红鳍东方染色体核型 6.2分子遗传学特征 RAPD的图谱 红鳍东方肌肉组织DNA的RAPD图谱见图3。 M M W 图3红鳍东方的RAPD图谱 注：a引物为CTGGGCACGA（5-3）b引物为CCTTTCCCTC（5-3'） c引物为GAGCGAGGCT（5-3'）d引物为CAGACAAGCC（5-3"） 7检测方法 7.1年龄的检测 按GB17716的规定执行。 7.2染色体和核型检测 3 SC 2018—2004 按GB/T18654.12的规定执行 7.3RAPD分析 7.3.1样品制备 基因组DNA的制备：于红鳍东方尾部取肌肉100mg，置研钵中充分研磨，加人500μL抽提 缓冲液（100mmol/mLTris-HCl，pH8.0；0.1mol/L乙二胺四乙酸，pH8.0），再加人终浓度分别 为0.5%的SDS和200ug/mL的蛋白酶K，55℃水浴消化，每10min缓摇-~次，3h左右消化完全， 溶液澄清，冷却后经酚、酚：氯仿（1:1）、氯仿各抽提一遍后，2倍体积预冷的无水乙醇沉淀DNA， 70%乙醇洗涤，晾干后用适量双蒸水溶解，65℃灭活10min后，一4℃保存备用。 7.3.2 RAPD 反应 反应体系包括 50 mmol/LKCl，10 mmol/mL Tris -HCl （pH8.0)，0.1% 的 TritonX-100；2.0 mmol/L MgCl2；0.1 mmol/L dNTP;0.2 μ mol/L引物，20 ng 基因组 DNA，0.6 UTagDNA 聚合酶, 总反应体积为25μL。RAPD反应过程为：95℃预变性5min后进入45个PCR循环（每个循环包括 94℃1min，36℃1min，72℃2min），最后72℃充分延伸10min。RAPD反应结束后4℃保存。 RAPD产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，EB染色紫外灯下观察、拍照。 8判定规则 检测结果不符合第4章、第6章中任何一章要求的，则判定为不合格项；有不合格项的样品为不 合格样品。合格样品数与样品总数的比为合格率。 行业标准信息服务平台 4 SC 2018--2004 附录A (资料性附录) 红鳍东方体长与体重关系式 红鳍东方体长与体重关系式如式（A.1）所示。 W = 3.629 3 × 10-5 × L3.0 (A.1) 式中: W—鱼体体重，单位为克（g); L鱼体体长，单位为厘米（cm)。 行业标准信息服务平台 5