ICS 65.150 B 52 Sc 中华人民共和国水产行业标准 SC 1104—2007 泥鳅 Loach 行业标准信息服务平台 2007-12-18 发布 2008-03-01实施 中华人民共和国农业部 5发布 SC 1104—2007 前言 本标准的第4章、第6章第6.1条为强制性的，其余为推荐性的。 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由农业部渔业局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院长江水产研究所。 本标准主要起草人：方耀林、周瑞琼、汪登强、邹世平、张燕、许映芳。 行业标准信息服务平台 I SC 1104—2007 泥鳅 1范围 本标准规定了泥鳅[Misgurnus anguillicaudatus（Cantor)]的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗 传学特征及检测方法。 本标准适用于泥鳅的种质检测与鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T18654.1养殖鱼类种质检验第1部分：检验规则 GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法 GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定 GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析 3名称与分类 3.1学名 泥鳅[Misgurnus anguillicaudatus(Cantor)]。 3.2分类位置 鲤形目（Cypriniformes）、鳅科（Cobitidae）、花鳅亚科（Cobitinae）、泥鳅属（Misgurnus）。 4主要形态构造特征 4.1外部形态特征 4.1.1外形 体较长，前段稍圆，后段侧扁。头较尖，吻突出。口下位，呈马蹄形。唇发达，口须5对。眼小，眼间 隔狭窄，无眼下刺。背鳍起点在腹鳍起点稍前。胸鳍圆形，末端不达腹鳍。尾鳍圆形。尾柄上、下方有 窄扁的皮褶棱起。鳞片细小，埋于皮下。头部无鳞。体背及体侧灰褐色，并杂有许多小黑点，腹部白色 或浅黄色。尾鳍基底上部有一明显的黑斑，背鳍和尾鳍具黑色小斑，其他各鳍灰白色。 泥鳅的外部形态见图1。 图 1 泥鳅的外形图 4.1.2可数性状 4.1.2.1鳍式 背鳍鳍式:D.ii～ii-6～8。 1 SC 1104—2007 臀鳍鳍式：A.i～ii-5～6。 4.1.2.2侧线鳞 侧线鳞数：150~165。 4.1.2.3鳃粑数 第一鳃弓外侧鳃耙数：17～21。 4.1.3可量性状 体长为体高的5.8倍～8.7倍，为头长的4.6倍～7.6倍。头长为吻长的2.1倍～3.1倍，为眼径的 4.6倍～10.0倍，为眼间距的3.8倍～5.8倍。尾柄长为尾柄高的1.1倍～2.1倍。 4.2内部构造特征 4.2.1脊椎骨总数：4+39～43。 4.2.2：前室包于骨质囊内，后室退化仅遗留痕迹。 5生长与繁殖 5.1生长 不同年龄组体长和体重实测值见表1。 表1各年龄组体长和体重实测值 2 3 4 5 年龄，龄 1 12.0~16.0 15.5~19.5 18.5~21.5 体长，cm 6.0~10.0 8.7~13.3 体重,g 14.0~44.0 28.4~74.6 37.5~92.8 1.8~9.0 6.2~25.6 12.3~16.0 15.3~19.0 19.0~20.5 体长，cm 4.1~10.0 9.0~13.4 否 14.2~40.0 20.5~56.1 45.5~59.5 体重,g 1.0~10.8 7.5~26.4 5.2繁殖 5.2.1性成熟年龄 雌鱼为1+龄～2龄,雄鱼为1龄。 5.2.2产卵类型 泥鳅是一年中多次成熟、分批产卵的鱼类，卵黏性。长江流域地区产卵季节4月～8月，5月～6月 为繁殖盛期。开始繁殖水温为18℃～20℃，适宜温度为22℃～28℃。 5.2.3怀卵量 体长8cm～20cm，怀卵量为(0.2～2.4)×104粒；体长大于20cm，怀卵量可达3×104粒以上。 6遗传学特性 6. 1 细胞遗传学特性 泥鳅体细胞染色体数存在两种类型： a）2n=50，染色体臂数（NF)：64；组型公式：8m十6sm+36t，染色体组型见图2。 XK sr xxex an nnnn Annorn nn no nn rn 5μm 图2泥鳅染色体组型图(2n=50) 2 SC 1104—2007 b）4n=100，染色体臂数（NF）：128；组型公式：16m+12sm十72t，染色体组型见图3。 xx xx X x xx 义义 x x 00 on nn nn nn 20 an cu on n nn ^ 20 aa NA uu an an an nn 5μm 图3泥鳅染色体组型图（4n=100） 6.2生化遗传学特性 泥鳅眼乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳及扫描图见图4。泥鳅眼乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶带的 相对活性强度见表2。 LDH6 >LDH6 LBH: >LDHs SLDH4 LDH; LDH3 LDH2 LDH2 LDH, S LDHI + 图 4泥鳅眼乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图和扫描图 泥鳅眼乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶带的相对活性强度 表2 单位为百分率 LDH: 酶 带 LDHi LDH2 LDH4 LDHs LDH. 27.18 1. 89 相对活性强度 21. 58 10.61 17.52 21.22 标准信息服务平台 检测方法 7.1抽样 按GB/T18654.2的规定执行。 7.2主要形态构造特征 按GB/T18654.3的规定执行。 7.3年龄鉴定 7.3.1取背鳍起点以下至侧线鳞之间的鳞片10片左右。 3 SC 1104--2007 7.3.2在鱼体表取鳞部位涂上少许淡氨水，当表皮和黏液溶解成胶状后，用抹布将其擦去。此时，鱼体 体表上鳞片清晰可见。用镊子将鳞片取出后在清水中稍加浸洗，然后夹在玻片上，备年龄鉴定。 7.3.3在显微镜(10X4)倍或(10×5)倍下，依据泥鳅鳞片上的年轮标志数目鉴定年龄。泥鳅鳞片上环 数目代表年龄数。 7.4怀卵量测定 于繁殖季节，对临产卵前雌鱼进行活体解剖,取出性成熟的卵巢（IV期），称重后，在卵巢组织前、中、 后部各取0.5g左右试样，用5%福尔马林溶液固定，在解剖镜下计数开始沉积卵黄的卵粒数，平行两 次,求得试样的平均卵粒数(即卵密度：粒/卵巢重),以卵密度乘以卵巢重，即得卵巢中所含的全部卵粒 数。雌鱼的绝对怀卵量(G)按式(1)计算： G=W(n1/2W样1+n2/2W样2).... ..... (1) 式中: 绝对怀卵量，单位为粒； M 卵巢重量，单位为克(g)； 试样1的卵粒数，单位为粒； n1 W样1 试样1重量，单位为克(g)； 试样2的卵粒数，单位为粒； n2 ~-- W样2 试样2重量，单位为克（g）。 7.5细胞遗传学特性分析 按GB/T18654.12的规定执行。 7.6生化遗传学分析 7.6.1试剂及配制方法 同工酶各种试剂的配制见附录A。 7.6.2样品的采集与制备 取泥鳅眼，加200μL磷酸缓冲液(0.1mol/L，pH7.1)在1mL匀浆器中冰浴匀浆，勾浆液于4℃、 12000r/min离心30min，取上清液，重复以上离心过程两次至上清液澄清。 7.6.3制胶 先将混匀的6.5%分离胶液倒人模板约3/4高度，小心在上面注人双蒸水，置于36℃左右30min。 待凝胶聚合好以后，倒掉上面的水，将混匀的3.0%浓缩胶倒人模板，插好梳子，置于36℃左右30min， 待凝胶聚合好以后，置于冰箱中备用。 7.6.4点样 点样量为20μL。吸取20μL样与2μL～3μL加样指示剂混匀，一起加到样孔中。 7.6.5电泳分离 7.6.5.1采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度6.5%，浓缩胶浓度3.0%。 7.6.5.2电极缓冲液：上槽pH为8.3的Tris-甘氨酸，下槽pH为8.9的Tris-HCl。 7.6.5.3电泳：稳压300V(起始电流约44mA)电泳5h～6h(溴酚蓝跑出胶后2h以上）。 7.6.5.4染色：电泳结束后，放入预先配好并在37℃恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。 7.6.6扫描 本标准由双波长飞点扫描薄层分析仪根据酶带染色强度不同自动识别。 8检验规则与结果判定 按GB/T18654.1的规定执行。 4 SC 1104-2007 附录A (规范性附录) 同工酶各种试剂的配制 A. 1 磷酸缓冲液(0. 1 mol/ L,pH 7. 1)的配制 A. 1. 1A液(0. 1 mol/L,NazHPO4)配制:取 17.30 g NazHPO4· H,O(或 35.82 g NazHPO4 · 2H2O) 定容于1000mL蒸馏水中。 A. 1.2 B液(0.1 mol/L,NaHzPO)配制:取 13.80 g NaH2PO4 · H2O(或 15.60 gNaH,PO4· 2H,O) 定容于1000mL蒸馏水中。 A.1.3磷酸缓冲液由A液和B液按72：28的比例混合而成，现用现配。 A.2凝胶制备 A. 2. 1 凝胶制备溶液配制 各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表A.1。 表A.1各种凝胶制备溶液配方 溶液 配制方法 凝胶缓冲液 取Tris56.75g加200mL蒸馏水，用浓盐酸调pH为8.9,加蒸馏水到250mL，4℃贮存 凝胶储液 容到150mL，4℃贮存 AP