ICS 65.020.01 B 05 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2641—2014 植物源性食品中白藜芦醇和白藜芦醇苷的 测定高效液相色谱法 Determination of resveratrol and polydatin in plant origin products- High performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2014-10-17发布 2015-01-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2641—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：四川省农业科学院分析测试中心、农业部食品质量监督检验测试中心（成都）。 本标准主要起草人：雷绍荣、胡莉、郭灵安、仲伶俐、毛建霏、杨晓凤、侯雪、 行业标准信息服务平台 I NY/T2641—2014 植物源性食品中白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了植物源性食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于植物源性食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷含量的测定。 本标准白藜芦醇及白藜芦醇苷的检出限均为1.0mg/kg，定量限均为3.0mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经乙醇一水溶液勾浆提取后定容，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。 41 试剂和材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1无水乙醇(C,H.OH):色谱纯。 4.2甲醇(CHOH):色谱纯。 4.3提取溶液：无水乙醇+水=3+2（V+V），取300mL无水乙醇和200mL水混匀。 4.4白藜芦醇(resveratrol)：CAS号501-36-0.纯度≥96%。 4.5白藜芦醇苷(polydatin)：CAS号65914-17-2,纯度≥96%。 4.6标准储备溶液：分别准确称取白藜芦醇和白蒙芦醇苷标准品5.0mg，用甲醇溶液溶解并定容至10 mL，即为500mg/L的单标储备液，于一18℃下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为3个月。 4.7混合标准使用液：在使用中将标准储备液混合，并逐级稀释成0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、 4.8滤膜：0.45μm，有机相滤膜。 5仪器与设备 5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2天平：精度0.01mg，0.01g。 5.3匀浆机。 5.4粉碎机。 1. NY/T 26412014 6分析步骤 6.1试样制备 采用四分法分取样品，含水率高的样品，如新鲜蔬菜、水果等，取约200g于匀浆机中匀浆；含水率低 的样品，如花生、谷物等，进行粉碎，过250μm的筛。所有样品在一18℃条件下保存。 6.2提取 6.2.1含水率高的样品： 称取20.0g样品于100mL离心管中，加人10mL无水乙醇后在高速勾浆机中匀浆提取2min后， 于4000r/min离心10min，将上清液转入50mL容量瓶中，样品残渣再分别用10mL无水乙醇提取2 次，合并3次提取液，用无水乙醇定容至50mL，摇匀后用0.45um滤膜过滤，待测。 6.2.2含水率低的样品： 称取10.0g样品于100mL离心管中，加入15mL提取溶液（4.3）在高速匀浆机中匀浆提取2min 后，于4000r/min离心10min，将上清液转50mL容量瓶中，样品残渣再分别用10mL提取溶液 （4.3）提取2次，合并3次提取液，用提取液（4.3）定容至50ml，摇匀后用0.45μm滤膜过滤，待测。 6.3测定 6.3.1色谱参考条件 a) 色谱柱：Cg柱，250mmX4.6mm，5.0μum，或性能相当者； b) 流动相A为水；B为甲醇； c) 检测波长：306nm； d) 柱温：45℃； e) 进样量：10μL; g) 梯度洗脱条件，见表1。 表1梯度洗脱表 时间，min 流速，mL/min 流动相A，% 流动相B,% 0.0 0. 8 65.0 35.0 5.0 0. 8 40. 0 60.0 11.0 0.8 10.0 90.0 15. 0 0.8 0.0 100.0 16.0 0. 8 65.0 35.0 20.0 0.8 65.0 35.0 6.3.2色谱分析 峰面积比较定量。色谱图参见附录A。 7 ”结果计算 样品中白藜芦醇及白藜芦醇苷均以质量分数w计，单位为毫克每千克（mg/kg），按式(1)计算。 pxv (1) m 式中： 待测液中白藜芦醇及白藜芦醇苷的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V 定容体积，单位为毫升（mL）； 2 NY/T 2641—2014 一试样质量，单位为克（g）； 测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留三位有效数字。 8精密度 本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的 值是以95%的置信度来计算。本标准方法的精密度数据参见附录B。 行业标准信息服务平台 NY/T2641—2014 附 录 A (资料性附录) 标准溶液色谱图 5.0μg/mL白藜芦醇标准溶液色谱图见图A.1。 0.035 2 0.030 0.025 紫外吸收强度(AU) 0.020 0.015 0.010 0.005 0.000 S00'0- 0 5 10 15 保留时间（min） 说明： 白藜芦醇苷(Polydatin）； 行业标准信息服务平台 一白藜芦醇（Resveratrol)。 5.0μg/mL白藜芦醇标准溶液色谱图 图A.1 4 NY/T2641—2014 附录B （资料性附录 方法精密度 方法精密度见表B.1。 表B.1方法精密度 含量 参数 r R mg/ kg 5.0 1.08666 1.31214 白藜芦醇苷 20.0 3.65498 4.030 51 50.0 9.70996 11.7366 5. 0 0.26826 1. 175 47 白藜芦醇 20.0 3.72797 4.75444 50.0 7.847 07 13.4919 注：r为重复性限，R为再现性限。R是置信概率为95%时该方法的再现性 行业标准信息服务平台 5