ICS65.020.30 CCSB41 21 辽宁省地方标准 DB21/T3880—2023 规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒监测技 术规范 Technicalspecificationsformonitoringthemainvirusescarriedbymosquitoesand fliesintheenvironmentoflarge-scalepigfarms XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 辽宁省市场监督管理局  发布 DB21/T3880—2023 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：沈阳农业大学、辽宁伟嘉农牧生态食品有限公司。 本文件主要起草人：刘金玲、张欢、魏澍、冯寿华、张敏、房乃君、吴长德、王海龙、杨作丰、赵 宝凯、杜方原、魏园园、张皓淳、邓文超、耿庆华。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862。 文件起草单位通讯地址：沈阳农业大学（沈阳市沈河区东陵路120号），联系电话：024-88487054。 DB21/T3880—2023 1规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒监测技术规范 1范围 本文件规定了对规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒进行监测的技术要求。 本文件适用于规模猪场环境中蚊蝇携带主要病毒的监测，其他猪场参照使用。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T16551猪瘟诊断技术 GB/T18641伪狂犬病诊断方法 GB/T18648非洲猪瘟诊断技术 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法 GB/T22333日本乙型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验方法 GB/T27517鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T4137猪细小病毒病诊断技术 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate） 5样本采集 5.1采样人员 采样人员应符合NY/T541中的规定。 5.2采样时间 蚊子样本5月～10月采集，苍蝇样本每年4月～10月采集。每年应至少监测1次，并根据猪场 周边环境及疫情状况调整采样频率。 5.3采样地点 DB21/T3880—2023 2根据猪场布局，在猪舍、饲料库、粪便堆积场、污水处理井等场所设置采样点，采样点数量应根据 猪场规模确定。 5.4采样方法 5.4.1蚊子样本采用灯诱法采集。室外应选择远离干扰光源，背风场所作为诱蚊灯悬挂点，在离地1.5 m处挂灯，日落后20min开灯，连续诱捕蚊子2h关灯。室内安装时不应靠近门和能开启的窗，应与 照明光源靠近安装。 5.4.2苍蝇样本采用笼诱法采集。将捕蝇笼分别放置在诱捕地点，天凉时应放在较暖及背风地方，炎 热天气应放在阴凉的地方。诱饵宜使用糖醋水、腐鱼等有强烈气味的饵料。 5.5样本选择 每个蚊子采样点应至少选取30只腹部饱满蚊子放入1个灭菌自封袋，每个苍蝇采样点应至少选取 10只苍蝇放入1个灭菌自封袋，标记信息备用。剩余苍蝇、蚊子集中无害化处理。 5.6样本管理 5.6.1样本保存和运输 5.6.1.1采集的样本应采用保温容器加冰袋或干冰密封，应在8h之内运送到实验室。 5.6.1.2样本生物安全标识和运送流程应按照NY/T541确定的要求执行。 5.6.1.3样品到达实验室后，在2℃～8℃条件下保存应≤24h。若需长期保存，应放置于超低温冰 箱（≤－70℃），避免反复冻融。 5.6.2样本信息记录 完整、准确填写采样信息登记表，并归档备查。 6病原监测 6.1生物安全措施 样本处理及检测操作的生物安全措施应符合GB19489中的要求。 6.2样本前处理 按每个采样点灭菌自封袋中蚊子、苍蝇样本分别合样制样，先在生理盐水中漂洗1次～2次，置 于无菌研钵中，加入适量DEPC-H2O研磨匀浆，将匀浆液置于无菌离心管中，于4℃条件下12000r/min 离心10min，取上清液备用。 6.3监测项目 重点开展非洲猪瘟、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病等病原监测，其它病 种可根据猪场疫病状况和防控需要选择，如猪细小病毒感染、日本脑炎等。 6.4病原检测依据标准 病原检测依据标准见表1。