ICS 65.020.20 B 05 浙 江 DB3301 省 杭 州 市 地 方 标 准 DB 3301/T 1082—2018 堇叶紫金牛组培繁育技术规程 2018 - 06 - 20 发布 杭州市质量技术监督局 2018 - 07 - 20 实施 发 布 DB3301/T 1082—2018 前  言 本标准按照GB/T 1.1－2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规定起草。 本标准由杭州市林业水利局提出并归口 。 本标准主要起草单位：杭州市园林绿化股份有限公司、杭州市林木种苗管理中心。 本标准主要起草人：杨浩、孙英坤、胡亚芬、高凯、陈林敬、魏建芬、樊靖、姚涛、邱影、崔晓燕、 王霁、李红霞。 I DB3301/T 1082—2018 堇叶紫金牛组培繁育技术规程 1 范围 本标准规定了堇叶紫金牛（Ardisia violacea）组培快繁过程中的外植体制备、组织培养、炼苗、 上盆、容器苗管理、苗木出圃、档案管理等内容。 本标准适用于杭州市范围内堇叶紫金牛的组培繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306－2013 花卉种苗组培快繁技术规程 DB33/T 179 林业育苗技术规程 3 母株选择 选择长势旺盛、叶背暗紫色、叶脉清晰、无病虫害的植株作为组培繁殖母株，置于温室内培养。 4 外植体制备 4.1 外植体采集 选择健壮选择健壮、无病虫害、带休眠腋芽的新发茎段为外植体材料。外植体采集后宜当日进行消 毒处理，或保存于4℃冰箱，保存时间不宜超过2d。 4.2 4.2.1 外植体消毒 表面消毒 沿叶柄基部切除外植体材料的叶片，用小毛刷蘸取少量洗洁精轻轻刷洗茎段表面，反复刷洗叶腋附 近，用自来水冲洗干净；将外植体茎段切段，用0.1%的苯扎溴铵于磁力搅拌器上进行消毒处理,转速不 宜超过200转/min；处理时间与茎段幼嫩程度选择5min～12min；倒掉消毒液，在流水下冲洗30min～ 60min。 4.2.2 深度消毒 将表面消毒后的外植体材料置于无菌操作台上，用无菌水冲洗外植体茎段1次；使用75%乙醇溶液摇 晃消毒处理，处理时间根据茎段幼嫩程度选择15s～90s；倒掉乙醇溶液，用1%次氯酸钠溶液摇晃消毒处 理，处理时间与茎段幼嫩程度成反比，宜选择3s～10min；倒掉消毒液，用无菌水反复冲洗4～5次，每 次5min。 1 DB3301/T 1082—2018 5 组培扩繁 5.1 培养基制备 5.1.1 培养基制备方法 参照NY/T 2306－2013 花卉种苗组培快繁技术规程。 5.1.2 培养基配方 参照附录A。 5.2 初代培养 5.2.1 5.2.2 5.2.3 5.3 将外植体茎段切成长度约 2cm 的小段，并带有 1 个休眠腋芽。 用无菌刀片切除小段下端（芽向上）褐化部分，迅速接种到初代培养基上。 培养条件：温度 25±2℃、光照时间 10h/d、光照强度 1500Lx～2000Lx，相对湿度 60%～65%。 增殖培养 5.3.1 5.3.2 5.3.3 5.4 将新发的侧芽嫩茎切下，接种到增殖培养基上。 培养条件：温度 25±2℃，光照时间 12h/d，光照强度 2000Lx～2500Lx，相对湿度为 60%～65%。 培养约 40d 后分化产生大量侧芽和不定芽丛。 壮苗培养 5.4.1 将不定芽丛轻轻拨散成单个不定芽，将伸长的侧芽嫩茎切下，接种到壮苗培养基。 5.4.2 培养条件为温度 25±2℃、光照时间 12h/d、光照强度 2000Lx～2500Lx、相对湿度 60%～65%。 5.4.3 壮苗培养约 20d 后，再生小苗达到叶片数量 6 枚以上、高度 5cm 以上、茎粗 2mm 以上可进行生 根培养。 5.5 生根培养 5.5.1 切除再生小苗基部愈伤组织，接种到生根培养基上。 5.5.2 培养条件：温度 28±2℃、光照时间为 8h/d、光照强度 1000Lx～1500Lx、相对湿度 70%～80%。 5.5.3 生根培养 40d～50d 后，不定根或主根数量达到 4 条以上、根长 1cm～3cm、叶片数量 8 枚以上、 高度 5cm 以上、茎粗 2mm 以上可进行炼苗。 6 炼苗 6.1 炼苗条件 宜选择温室。炼苗控制条件：遮光率90%以上、温度20～25℃、相对湿度约60%。 6.2 炼苗方法 将组培瓶苗置于温室苗床上驯化25d～30d；移栽前3d～4d松动组培瓶盖，部分打开；移栽前1d～2d， 完全打开组培瓶盖，并加入少量无菌水，无菌水以达到最下端叶片为宜。 7 移栽 2 DB3301/T 1082—2018 7.1 基质准备 7.1.1 配方 选用粒径2cm～3cm的松鳞作为炼苗基质。基质应理化性能稳定、不带病菌、虫卵、杂草等。 7.1.2 分装 将炼苗基质分装到 42cm×42cm×5cm 方盘，摆放至苗床上，基质表面与方盘上边缘齐平为宜。 7.1.3 消毒 移栽前7d使用0.2%高锰酸钾对基质进行消毒处理，消毒液宜浸透基质底部，并用塑料薄膜覆盖严实。 7.2 移栽 7.2.1 轻轻取出生根苗，用清水洗净根部培养基后，以 3 株～4 株为一丛植入炼苗基质中，深度以基 质刚覆盖根系为宜，密度以 4cm×4cm 为宜。 7.2.2 生根苗植入方盘后浇透水，均匀喷洒 0.3%多菌灵溶液，用封闭小拱棚覆盖约 30d。小拱棚内温 度应控制在 28℃～33℃、相对湿度约 80%。覆盖期间可适当打开小拱棚两端通风以调节温度、相对湿度； 7.2.3 待小苗长出新的须状根并恢复正常生长后，打开小拱棚两端通风 7d～14d，然后完全打开小拱 棚培养 6 个月以上。通风期间应及时观测基质水分变化，适时补水以保持基质湿润。 8 上盆 8.1 基质准备 基质配方为50%珍珠岩、25%泥炭、25%松磷（体积比），充分拌匀备用。基质应理化性能稳定、不 带病菌、虫卵、杂草等。 8.2 容器选择 可选用12cmX10cm营养钵。 8.3 上盆 容器中装填1/2容器体积的基质，将方盘苗单株放入容器中间，装入基质盖住根系并墩实，基质低 于容器口1cm左右。 8.4 上盆苗摆放 于温室或阴盆区条状摆放，条宽1m～1.2m，留操作步道0.5m。 9 容器苗管理 9.1 遮阴 遮光率应达到70%以上。 9.2 水分管理 上盆后及时浇透水，隔天检查基质水分情况，水分不足的及时补浇；梅雨季应注意排水。 3 DB3301/T 1082—2018 9.3 病虫害防治 上盆1个月后，喷施0.1%～0.3%除蜗灵或预防蜗牛危害，并喷施0.1%～0.15%多菌灵溶液预防病害。 10 苗木出圃 10.1 出圃质量要求 无病虫害；1年～2年生容器苗XXX，2年～3年生容器苗XXX。叶背暗紫色、叶脉清晰；根系发达、无 机械损伤。 10.2 容器苗出圃 按 DB33/T 179 执行。 10.3 苗木检疫 按照《植物检疫条例实施细则（林业部分）》进行检疫。 10.4 包装与运输 按 DB33/T 179 执行。 11 档案管理 按 DB33/T 179 执行。 4 DB3301/T 1082—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 堇叶紫金牛常用培养基配方 A.1 堇叶紫金牛常用培养基配方 表 A.1 堇叶紫金牛常用培养基配方 基本培 氯吡苯脲(CPPU) 萘乙酸(NAA) 吲哚丁酸(IBA) 蔗糖 卡拉胶 活性炭(AC) 养基 mg/L mg/L mg/L g/L g/L g/L 初代培养基 MS 0.15～0.30 0.10～0.20 — 30 7 — 5.8～6.2 增殖培养基 MS 0.50～0.80 0.10～0.20 — 30 7 — 5.8～6.2 壮苗培养基 MS 0.10～0.15 — — 30 7 — 5.8～6.2 生根培养基 1/2MS — 0.50～0.80 0.50～0.80 20 7 0.5 6.0 pH 注：1/2MS培养基是MS培养基大量元素减半。 A.2 堇叶紫金牛基本培养基成分 表 A.2 堇叶紫金牛基本培养基成分 名称 大量元素 微量元素 铁盐 有机物 蔗糖 卡拉胶 成分 NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4 CoCl2·6H2O FeSO4·7H2O Na2EDTA 肌醇 盐酸硫胺素 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 蔗糖 卡拉胶 浓度(mg/l) 1650 1900 440 370 170 0.83 6.20 22.30 8.60 0.25 0.025 0.025 27.80 37.30 100.00 1.00 0.50 0.50 2.00 30000 7000 _________________________________ 5