ICS 65.020.20 B 05 DB3310 浙 江 省 台 州 市 地 方 标 准 DB 3310/T 61—2019 荸荠组培种苗生产技术规程 Technical specification for tissue culture seedling production of water chestnut (Eleocharis dulcis) 2019 - 12 - 12 发布 台州市市场监督管理局 2020 - 01 - 01 实施 发 布 DB3310/T 61—2019 前 言 本标准按 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由台州市农业农村局提出并归口。 本标准起草单位：台州市农业科学研究院、台州市农业技术推广总站。 本标准主要起草人：赖小芳、唐兴国、潘晓飚、陈银龙、曾孝元、陈伟强、洪霞、王伯诚。 I DB3310/T 61—2019 荸荠组培种苗生产技术规程 1 范围 本规程规定了荸荠组培相关的术语和定义、组培种苗生产、组培苗炼苗、出苗、组培苗二段育秧技 术等内容。 本标准适用于荸荠种苗组培快繁生产、管理与田间应用的全过程。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 荸荠组培种苗 利用荸荠球茎顶芽或侧芽作为外植体，通过植物组织培养方式培育获得的完整植株。 3.2 外植体 从自然生长的活体上获取的用于进行植物组织培养的起始材料。 3.3 试管苗 在培养容器中生长且已达到移栽标准的根、茎、叶俱全的完整植株。 3.4 琼脂苗（组培瓶苗） 生长在固体培养基（凝固剂一般为琼脂）中的组培生根苗。 3.5 无琼脂苗 从培养容器中取出并洗去表面培养基的组培生根苗。 3.6 继代培养 植物组织培养过程中，培养物经过一段时间培养后，基于补充培养基养分、清除有害代谢产物、防 止培养物老化等目的，定期将其接种到新配制的培养基上继续进行培养的过程。 1 DB3310/T 61—2019 4 组培种苗生产 4.1 无菌材料的获得 4.1.1 外植体选择 选择具有原品种典型性状、芽头健壮、大小均匀、无病完整的荸荠球茎，切取顶芽或饱满腋芽。 4.1.2 外植体处理、消毒及接种 4.1.2.1 外植体处理 将球茎用 1.5 % 洗衣粉溶液浸泡(10～15) min，洗净表面泥土，自来水冲洗 1 h，剥除球茎顶芽的叶 鞘，挖取带一点球茎果肉的顶芽或侧芽，剔除果肉，切取(3～5) mm 的芽尖。 4.1.2.2 外植体消毒 无菌条件下，将切出的芽尖用 0.1 ％ 升汞溶液（内加 2～3 滴“Tween-80”表面活性剂，以便提高 灭菌剂活力）浸泡搅拌(8～10)min，无菌水冲洗 5 次～8 次，吸干表面水分，通过解剖镜对芽尖进行二 次切割，切取(0.5～1) mm 的茎尖，将茎尖接入预先准备的培养基上。 4.1.2.3 外植体接种 外植体接种按 NY/T 2306-2013“9.3 外植体接种”实施。 4.1.2.4 培养基配方 相关培养基配方参见附录 A。 1.1.1 外植体培养 4.1.2.5 材料摆放 将接种完成材料置于专用培养筐，整齐排放于培养架上进行培养。 4.1.2.6 培养环境 培养温度(25±3) ℃，光照强度(1000～1500) lx，光照时间(10～12) h/d。 4.1.2.7 材料管理 每周观察记录，及时清理污染。 4.2 不定芽诱导 4.2.1 无菌条件下，取本标准“4.1”获得的高(1.5～2.0) cm 的无菌、成活芽萌发材料，从芽基部切取结 构完整的芽，接入不定芽诱导培养基，培养环境同本标准“4.1.3”。接种过程按照 NY/T 2306-2013 “10 接 种操作”实施。 4.2.2 相关培养基配方参见附录 A。 4.3 扩大繁殖 4.3.1 增殖培养 2 DB3310/T 61—2019 4.3.2 无菌条件下，将本标准“4.2”获得的簇生、增殖良好荸荠培养材料从簇生芽基部切割分离，保持 丛芽高度(1.5～3.0) cm，以 2 个～3 个不定芽为接种单位，接入增殖培养基，培养环境同本标准“4.1.3”。 每 35 d～40 d 继代 1 次。 4.3.3 相关培养基配方参见附录 A。 4.3.4 培养材料保存 将待保存材料移至温度(18±2)℃、光照强度(800～1000)lx、光照时间(8～10) h/d环境中培养。每隔 90 d 继代 1 次。 4.3.5 培养材料保存周期 在上述环境中培养保存的组培材料，继代保存代数应控制在 15 代以内。 4.4 生根培养 4.4.1 材料选择 选择株高≥5 cm 的增殖苗进行生根诱导。 4.4.2 接种方法 无菌条件下，将簇生增殖苗从基部切割分离，以单个不定芽为单位接入生根诱导培养基。 4.4.3 培养环境 培养环境同本标准“4.1.3”，培养周期 25 d。 4.4.4 培养基配方 相关培养基配方参见附录 A。 5 组培苗炼苗 5.1 待荸荠组培苗苗高≥7 cm、基部长出 3 条～7 条(2.0～5.0) cm 长的白色不定根，即可进行炼苗。 5.2 将试管苗移至室外开放环境中放置 2 d，第 3 天拧松瓶盖（但不要开盖），第 4 天向瓶内加少量水， 斜放瓶盖露出部分缝隙，第 5 天完全揭开瓶盖，之后每天向瓶内喷适量水，直至试管苗上部发黄为止， 炼苗时间(8～10) d，第 10 天可取出试管苗，洗净根部琼脂或溶液，移栽至秧田。 6 出苗 6.1 出苗前准备 荸荠种苗出苗类型包括琼脂苗（组培瓶苗）、无琼脂苗。出苗前需检查种苗质量，确认无污染、无 病害。 6.2 包装、标签及运输 6.2.1 包装 6.2.1.1 琼脂苗（组培瓶苗）包装 3 DB3310/T 61—2019 培养瓶放入泡沫箱内，培养瓶之间填充防撞缓冲材料，泡沫箱外以通用纸箱包装，外包装标识应包 括防撞、防摔、请勿倒置等。 6.2.1.2 无琼脂苗包装 无琼脂苗预先装入小塑料盒，再放入泡沫箱内，泡沫箱外以通用纸箱包装，外包装标识应包括防撞、 防摔、请勿倒置等。 6.2.2 标签 每箱应贴标签，注明品种、规格、数量、产地、出苗日期、注意事项等。 6.2.3 运输 用厢式货车密闭运输，装车时纸箱不可倒置，运输途中温度保持(10～25)℃，应在 5 d 内到达目的 地。 7 组培苗二段育秧技术 7.1 培育壮苗 7.1.1 秧田的选择与整理 7.1.1.1 秧田应选择地势平坦、肥力中等、排灌方便的水田，其土壤应不漏水、不漏肥、不过于紧实。 组培苗秧田不宜施用有机肥。 7.1.1.2 移栽前一个月翻耕，每公顷撒施生石灰 1125 kg 进行土壤消毒，其间耙耕 2 次～3 次，使田土 成泥糊状。 7.1.1.3 移栽前 2 d～3 d，每公顷施过磷酸钙 375 kg、硫酸钾型复合肥 75 kg，耙匀耙平，待泥浆沉淀 后起畦，畦面宽 120 cm、畦高 10 cm、畦间沟宽 30 cm、畦面平整，使畦面不积水、行沟内能储水，方 便排灌。 7.1.1.4 相关肥料使用按 NY/T 496 执行。 7.1.2 移栽时间 每年 4 月 15 日左右开始育苗，育秧期约 35 d。 7.1.3 组培苗移栽技术 阴雨天气，移栽可全天进行，晴朗天气，移栽在下午进行。移栽时将清洗干净的组培苗自然分株、 勿伤根系，以浅插种稳为宜，插植深度(2～3) cm，株行距（8×8）cm。移栽后搭建小拱棚，覆盖薄膜和 遮阳网。 7.1.4 苗期管理 7.1.4.1 移栽后的前 3 d 不开膜；3 天后拆除遮阳网。移栽后的前 10 d，沟内保持水层，床面保持湿 润。棚内温度超过 25 ℃ 时，打开薄膜两头，傍晚降温后及时关棚，10 d 后温度稳定在 20 ℃ 以上可拆 除全部薄膜；新叶长出(3～5)㎝，床面可回水 0.5 ㎝；大雨过后应及时排水，防止田水没顶。 7.1.4.2 拆膜后喷药防病防虫，同时结合根外追肥，用 2‰～5‰的磷酸二氢钾溶液喷施、5 d 一次、 连喷 2 次～3 次；遇高温阴雨天气，雨停后应立即喷药防病。 4 DB3310/T 61—2019 7.1.4.3 35 d 后苗高约 20 cm，转入下一阶段。 7.1.4.4 相关肥料使用按 NY/T 496 执行，相关农药使用按 NY/T 1276 执行。 7.2 种苗扩繁 7.2.1 整地与施肥 7.2.1.1 繁殖田的选择与育苗田相同。种苗移栽前 20 d 每公顷施腐熟有机肥 11250 kg，种苗移栽前 1 d 每公顷施硫酸钾型复合肥 225 kg、过磷酸钙 600 kg，耙平田面使肥料均匀，保持水层(2～5) cm。 7.2.1.2 相关肥料使用按 NY/T 496 执行。 7.2.2 移栽时间 5 月中旬开始移栽，移栽后扩繁时间(50～60) d。 7.2.3 移栽技术 移栽前从苗床拔出带泥组培苗，剔除杂、变异株，杀菌液泡根消毒；单株插植，株行距（80×80） m，拉线分厢(4～5) m一厢，留工作行约 1 m。 7.2.4 繁殖田肥水管理 7.2.4.1 移栽后，田里保持(2～5) cm 水层，秧苗返青后开始追肥，每公顷撒施硫酸钾型复合肥 75 kg、 尿素 45 kg，每 10 d 一次、连施两次，30 d 后每公顷再施硫酸钾型复合肥 150 kg，封行后控肥控水，移 栽前 10 d 停止施肥。 7.2.4.2 相关肥料使用按 NY/T 496 执行。 7.2.5 病虫防治 以预防为主、综合防治为原则。注意防治秆枯病、枯萎病、白禾螟等，移栽前 5 d 喷一次杀菌剂， 使苗带药到大田。相关肥料使用按 NY/T 496 执行，相关农药使用按 NY/T 1276 执行。 7.3 注意事项 种植组培苗的注意事项参见附录 B。 5 DB3310/T 61—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 荸荠组培不同阶段参考培养基 荸荠组培不同阶段参考培养基见表 A.1。 表A.1 荸荠组培不同阶段参考培养基 -1 外植体培养阶段 MS + 6-BA（0.5～1.0）mg·L 不定芽诱导阶段 MS + 6-BA （1.0～1.5）mg·L 增殖培养阶段 MS + 6-BA（1.5～2.0）mg·L 生根培养阶段 MS + NAA （0.05～0.2）mg·L + NAA（0.01～0.02） -1 mg·L -1 -1 -