ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2056—2020 盐碱地苜蓿青贮品质检测技术规程 Technical code for detection silage quality of alfalfa in saline-alkali soil 2020-12-24 发布 2021-01-24 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2056—2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由内蒙古自治区饲料工业标准化技术委员会（SAM/TC 04）提出并归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古科技咨询评估中心、内蒙古农牧业科学院、中国农业科 学院草原研究所、内蒙古民族大学。 本文件主要起草人：王志军、贾玉山、卢强、格根图、撒多文、孙林、侯美玲、刘鹰昊、降晓伟、 任志花、李俊峰、袁宁。 I DB15/T 2056—2020 盐碱地苜蓿青贮品质检测技术规程 1 范围 本文件规定了盐碱地苜蓿青贮品质检测的术语和定义、检测指标、检测内容和检测方法等内容。 本文件适用于盐碱地苜蓿青贮饲料的品质检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 5009.237 食品安全国家标准 食品pH值的测定 GB/T 6433 饲料中粗脂肪的测定 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定 GB/T 22142 饲料添加剂 有机酸通用要求 GB/T 24318 杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算 NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维的测定 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 NY/T 2742 水果及制品可溶性糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 盐碱地苜蓿 Saline-alkali alfalfa 在沙壤或轻度黏土，盐分含量为0.4 %以下、pH值为7.5～9的土地上种植的苜蓿。 3.2 苜蓿青贮 alfalfa silage 苜蓿原料在密闭厌氧条件下利用乳酸菌的发酵作用，产生乳酸，降低pH值，使有害微生物受到抑 制而得以长期保存的饲料。 1 DB15/T 2056—2020 4 取样 取样方法按照NY/T 2129的规定执行。 5 样品处理 5.1 青贮浸提液制备 将青贮苜蓿与蒸馏水按照料液比1：9混合，经拍打式均质器拍打2 min，经4 层纱布过滤，再经滤 纸过滤。 5.2 风干样品制备 将青贮苜蓿置于65 ℃条件下烘至恒重，各指标粉碎细度见表1，粉碎后密封保存。 表1 不同检测指标的粉碎细度 单位为毫米 粉碎细度 类型 1.00 指标 中性洗涤纤维 酸性洗涤纤维 0.425 亚硝酸盐 粗蛋白质 6 发酵品质检测 6.1 pH 值 pH按照GB/T 5009.237的规定执行。 6.2 氨态氮 氨态氮含量的测定方法按照附录A执行。 6.3 有机酸 乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量按照GB/T 22142的规定执行。 7 青贮饲料营养品质检测方法 7.1 水分 按照GB/T 6435的规定执行。 7.2 粗蛋白质 按照GB/T 24318的规定执行。 2 可溶性糖 粗灰分 粗脂肪 DB15/T 2056—2020 7.3 中性洗涤纤维 按照GB/T 20806的规定执行。 7.4 酸性洗涤纤维 按照NY/T 1459的规定执行。 7.5 可溶性糖 按照NY/T 2742的规定执行。 7.6 粗脂肪 按照GB/T 6433的规定执行。 7.7 粗灰分 按照GB/T 6438的规定执行。 8 亚硝酸盐检测 亚硝酸盐含量的测定方法按照附录B执行。 3 DB15/T 2056—2020 附 录 A （规范性） 氨态氮含量的测定方法 A.1 试剂 A.1.1 硼酸缓冲液（pH值9.5） 0.2 mol/L的硼酸钠溶液和0.l mol/L的氢氧化钠溶液按体积4：1比例混合后，并将pH值调节至9.5。 A.1.2 硼酸乙醇溶液（2 %） 将20 g硼酸（分析纯）溶于800 mL无水乙醇（分析纯）后，用蒸馏水定容至1 L。 A.1.3 盐酸溶液（0.01 mol/L） 配制0.01 mol/L盐酸溶液，并用0.0l mol/L标准氢氧化钠溶液对其标定。 A.1.4 甲基红溴甲酚绿混合指示剂 A.2 测定步骤 取青贮浸提液2 ml和硼酸缓冲液10 ml加入凯氏定氮蒸馏装置。冋三角瓶内加2 %硼酸乙醇溶液5 ml 和3 滴～4 滴甲基红溴甲酚绿混合指示剂后，将三角瓶接入凯氏定氮装置的冷却管处，要求冷却管前端 进入三角瓶液面下。蒸馏7 min后，将冷却管离开液面，再蒸馏2 min（若蒸馏液不满50 ml时，应使蒸 馏液达到50 ml为止）。蒸馏结束后，用0.01 mol/L标准盐酸溶液对蒸馏液进行滴定。 A.3 计算方法 氨态氮含量的计算公式为： 1 V (%)  0.14  F  B   2 式中： V —— F —— B —— A —— W —— 4 180  A W 100  100 .................................（A.1） A 1000 氨态氮含量，单位为鲜样的质量百分比（%）； 用0.01 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定0.01 mo1/L盐酸滴定液的滴定系数； 滴定值，单位为毫升（mL）； 青贮饲料样品质量，A=20，单位为克（g）； 青贮饲料的水分含量，单位为百分比（%）。 DB15/T 2056—2020 附 录 B （规范性） 亚硝酸盐含量的测定方法 B.1 方法 比色法。 B.2 原理 在弱酸条件下，样品中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物后，再与N-1-萘基乙二胺偶 合形成紫红色化合物，在波长538 nm条件下达到最大吸光值，进行比色测定。 B.3 材料和试剂 所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级以上水。 B.3.1 材料 样品粉碎细度为1 mm。 B.3.2 试剂 B.3.2.1 亚硝酸钠标准溶液 称取0.2000 g亚硝酸钠，加水定溶于1000 mL容量瓶中，并吸取5 mL定溶于200 mL容量瓶中。 B.3.2.2 对氨基苯磺酸溶液 称取5.0000 g对氨基苯磺酸，加700 mL水和300 mL冰乙酸中，混匀，置于棕色瓶避光保存。 B.3.2.3 氯化铵缓冲溶液 在1000 mL容量瓶中加入500 mL水，加入20 mL盐酸，混匀后加入50 mL氢氧化铵，使用盐酸和氢氧 化铵调节pH至9.6～9.7。 B.3.2.4 N-1-萘基乙二胺溶液 称取0.1000 g N-1-萘基乙二胺，加乙酸（浓度为60%）定容至100 mL，混匀后置于棕色瓶中，于4 ℃ 冰箱内保存，有效期为7 d。 B.3.2.5 显色剂 将对氨基苯磺酸溶液（7.6.3.2.2）和N-1-萘基乙二胺溶液（7.6.3.2.4）等体积混合即为显色剂， 需临时配制。 B.3.2.6 氢氧化钠溶液 称取20 g氢氧化钠，加水定溶于1000 mL容量瓶中。 B.4 仪器 分光光度计和分析天平（感量0.0001 g）。 5 DB15/T 2056—2020 B.5 分析测试 B.5.1 标准曲线 分别准确移取0 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL的亚硝酸钠标准溶液（7.6.3.2.1）， 分别置于25 mL比色管中，加入4.5 mL氯化铵缓冲溶液（7.6.3.2.3）和2.5 mL乙酸（浓度为60 %）后， 立即加入5.0 mL显色剂（7.6.3.2.5），用水定容至刻度线，混匀，于避光处静置25 min。用1 cm比色 杯，以空白试剂作对照，于538 nm处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，标准系列中亚硝酸钠的含量为 横坐标，绘制标准曲线。 B.5.2 样品处理 称取约5 g试样，精准到0.001 g，置于200 mL锥形瓶中，加70 mL水和氢氧化钠溶液（7.6.3.2.6）， 混匀，用氢氧化钠溶液调节pH至8～9，加入硫酸锌溶液，混匀，直至产生白色沉淀为止。置于60 ℃水 浴加热10 min，取出后冷却至室温，将溶液倒入200 mL容量瓶中，加水定容至刻度线，混匀。放置30 min， 过滤，弃去初滤液20 mL，收集剩余滤液为试液，备用。 B.5.3 样品测定 取10 mL样品滤液于25 mL比色管中，并按照7.6.5.1的步骤加入氯化铵等溶液，测量样品的吸光度 值。 B.6 数据处理 样品中的亚硝酸盐含量（mg / kg）的计算公式为： X m2  V 1 1000 .................................（B.1） m1  V 2 1000 式中： m1 —— 样品重量，单位为克（g）； m2 —— 试液中亚硝酸盐的含量，单位为微克（μ g）； V1 —— 样品处理液的总体积，单位为毫升（mL）； V2 —— 测定用试液的体积，单位为毫升（mL）； 1000 —— 单位换算系数。 B.7 精密度 在重复性条件下获得的两次测试结果与其算数平均数的绝对差不大于平均值的10 %。 6