(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210240033.8 (22)申请日 2022.03.10 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114717328 A (43)申请公布日 2022.07.08 (73)专利权人 广东省农业科 学院植物保护研究 所 地址 510640 广东省广州市五山 街道金颖 路7号农业科 学院植物保护研究所 (72)发明人 袁龙宇　雷浩霖　肖汉祥　李燕芳　 张振飞　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 肖云(51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 10740 6849 A,2017.1 1.28 CN 101365796 A,20 09.02.11 胥丹丹等.我国入侵昆虫 学研究进 展. 《应用 昆虫学报》 .2017,(第0 6期), 彭露等.中国入侵昆虫 预防与控制研究进 展. 《应用昆虫 学报》 .2020,(第02期), 审查员 谷城橙 (54)发明名称 一种基于SCAR-PCR技术在稻水象甲肠道检 测其食性的方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于SCAR ‑PCR技术在稻 水象甲肠道检测其食性的方法， 涉及分子生物学 检测技术领域。 本发明的方法包括以下步骤： S1： 提取待测稻水象甲样品的基因组DNA； S2： 利用 SCAR引物对LH ‑ycf4‑F/R、 OS‑AGL‑F/R和PD ‑ ndhF‑F/R， 分别对基因组DNA进行SCAR ‑PCR反应； S3： 将所述步骤S2中的SCAR ‑PCR产物作为模板进 行第二轮SCAR ‑PCR反应， 引物与所述步骤S2相 同； S4： 将所述步骤S3中的SCAR ‑PCR产物进行琼 脂糖凝胶电泳并分析电泳结果。 该方法步骤简 单， 耗时短， 准确性高， 能定性评估稻水象甲的食 性， 极大地降低了对工作人员专业知识的要求。 权利要求书2页 说明书12页 序列表2页 附图4页 CN 114717328 B 2022.12.27 CN 114717328 B 1.一种检测稻水象甲食性的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 提取待测稻水象甲样品的基因 组DNA； S2： 利用核苷酸序列为SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的SCAR引物对LH ‑ycf4‑F/R， 核 苷酸序列为SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示的SCAR引物对OS ‑AGL‑F/R， 以及核苷酸序列为 SEQ ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示 的SCAR引物对PD ‑ndhF‑F/R， 分别对所述基因组DNA进行 SCAR‑PCR反应， 分别得第一PCR产物、 第二PCR产物和第三PCR产物； S3： 利用所述SCAR引物对LH ‑ycf4‑F/R对所述第一PCR产物进行SCAR ‑PCR反应， 利用所 述SCAR引物对OS ‑AGL‑F/R对所述第二PCR产物进行SCAR ‑PCR反应， 利用所述SCAR引物对PD ‑ ndhF‑F/R对所述第三PCR产物进行SCAR ‑PCR反应， 分别得第四PCR产物、 第五PCR产物和第六 PCR产物； S4： 取5μL步骤S3中的所述第四PCR产物、 所述第五PCR产物和所述第六PCR产物在琼脂 糖凝胶中进行电泳， 并分析电泳结果， 判断所述待测稻水象甲样品的食性； 步骤S1中， 所述待测稻水象甲样品为稻水象甲 的中肠； 步骤S4中， 所述电泳结果的分析方法为： 如果所述第四PCR产物的电泳结果显示有大小 约为216bp的条带， 则判断所述待测稻水象甲取食李氏禾； 如果第五PCR产物的电泳结果显 示有大小约为203bp的条带， 则判断所述待测稻水象甲取食水稻； 如果第六PCR产物的电泳 结果显示有大小约为247bp的条 带， 则判断所述待测稻水象甲取食双穗雀稗。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述稻水象甲的中肠的前处理方法为： 保 持在液氮 环境中研磨所述中肠至无 可视颗粒物。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤S2中， 所述SCAR ‑PCR反应中， 所述SCAR 引物对LH ‑ycf4‑F/R的反应 体系包括： 所述SCAR引物对OS ‑AGL‑F/R的反应 体系如下： 所述SCAR引物对P D‑ndhF‑F/R的反应 体系如下：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114717328 B 24.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述步骤S2中， 所述SCAR ‑PCR反应的扩增 程序为： 94℃5mi n； 94℃30s， 60℃30s， 72℃3 0s， 30个循环； 72℃5mi n。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述SCAR ‑PCR反应中， 所述SCAR 引物对LH ‑ycf4‑F/R的反应 体系包括： 所述SCAR引物对OS ‑AGL‑F/R的反应 体系如下： 所述SCAR引物对P D‑ndhF‑F/R的反应 体系如下： 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤S4中， 所述琼脂糖凝胶的浓度为1 ‑ 2％。 7.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤S4中， 所述电泳的电压为100 ‑120V， 所 述电泳的时间为20 ‑40min。 8.权利要求1 ‑7任一项所述的方法在检测稻水象甲食性中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114717328 B 3