ICS 65.020.20 B 05 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1659—2017 何首乌组培苗生产技术规程 Technical regulations for tissue culture seeding of Fallopia multiflora 2017 - 12 - 30 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 01 - 30 实施 发 布 — DB45/T 1659 2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室。 本标准主要起草人：曾文丹、严华兵、陆柳英、谢向誉、肖亮、赖大欣。 I — DB45/T 1659 2017 何首乌组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了何首乌组培苗生产的组织培养、组培苗移栽、苗期管理和出圃等技术内容。 本标准适用于广西境内何首乌组培苗生产。 2 组织培养 2.1 培养基配制及灭菌 各阶段培养基配方参见附录 A。灭菌温度为 121℃，灭菌时间为 22 min。 2.2 外植体 2.2.1 母本圃种植 将优良种源种植在温室内，加强肥水管理，确保植株健壮。 2.2.2 外植体的采集 宜选择连续2 d以上的晴天上午进行。从健康植株上选择生长健壮、无病虫害的优良单株幼嫩茎段， 用消毒的枝剪去除叶片后剪成带一个芽的单芽茎段。 2.2.3 外植体表面灭菌 2.2.3.1 预处理 将带芽茎段放入加有0.2％洗洁精的溶液中浸泡并振荡5 min～10 min，用软毛刷清洗表面污垢，在 流水中冲洗30 min～60 min后备用。 2.2.3.2 消毒处理 在超净工作台上，将已清洗干净的外植体转移至无菌培养瓶中，倒入75％酒精使之没过外植体，并 轻轻震荡15 s～30 s后将酒精倒去，用无菌水冲洗3～5次。随后，用0.1％升汞溶液浸泡处理6 min～8 min， 并轻摇以除去外植体表面气泡，倒出升汞后用无菌水冲洗4～5次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后待 用。 2.3 初代培养 在超净工作台上，将表面灭菌处理的单芽茎段接入初代培养基上进行培养。培养周期为45 d～55 d。 培养条件：培养温度为23 ℃～25 ℃，光照强度为1 500 lx～2 000 lx，光周期14 h～16 h。 2.4 增殖培养 在超净工作台上，将初代培养的无菌苗切成单芽茎段转接到增殖培养基上进行培养。培养周期为 30 d～35 d。培养条件同初代培养。 1 — DB45/T 1659 2017 2.5 壮苗生根培养 在超净工作台上，将继代增殖培养的不定芽切成单芽茎段转入生根培养基进行生根培养。培养周期 为25 d～30 d。培养条件同初代培养。 3 组培苗移栽 3.1 炼苗 生根培养 25 d～30 d 后，将株高 3 cm～5 cm、生长健壮、根系发达的无污染瓶苗从培养室移入温室， 炼苗 3 d～5 d，去除瓶盖后再炼苗 1 d～2 d。 3.2 清洗 用镊子将小苗夹出，用清水洗去生根苗根部的培养基，置于 0.05％高锰酸钾溶液浸泡 1 min～2 min 或 50％多菌灵可湿性粉剂 800～1 000 倍溶液浸泡 8 min～10 min。 3.3 移栽 3.3.1 时间 以春季3～4月为宜。 3.3.2 基质 以泥炭土：珍珠岩：黄土体积比为2:2:1的基质为宜。组培苗移栽前24 h～48 h用0.5％高锰酸钾溶 液对移栽基质进行消毒。 3.3.3 移植 将清洗干净的组培苗移栽于盛满基质并消毒的15 cm×15 cm塑料营养钵中，每一个营养钵种植1株， 种植后浇透定根水。 4 苗期管理 组培苗移栽2～3周内宜用薄膜小拱棚保湿，相对湿度控制在80％～90％，光照控制在5 000 lx～ 10 000 lx。4周后逐渐打开薄膜，并增大光照强度。移栽15 d～20 d后，每隔10 d～15 d淋湿或喷湿尿素， 喷施浓度以0.2％～0.5％为宜。 5 出圃 5.1 出圃苗要求 苗高15 cm～25 cm，叶片5～10片，根长3 cm以上，苗木完整，长势好、叶色深绿、无病害。 5.2 苗木运输 运输苗木时，用塑料筐或泡沫箱成捆装箱，勿挤压。 2 AA — DB45/T 1659 2017 附 录 A （资料性附录） 培养基配方 A.1 培养基配方 A.1.1 初代培养基配方 MS＋BA 0.02 mg/L＋NAA 0.02 mg/L＋蔗糖30 g/L＋6.0 g/L琼脂，pH5.8～6.0。 A.1.2 继代增殖培养基配方 MS＋BA 2.00 mg/L＋NAA 0.02 mg/L＋蔗糖30 g/L＋6.0 g/L琼脂，pH5.8～6.0。 A.1.3 生根培养基配方 1/2MS＋NAA 0.1 mg/L＋蔗糖30 g/L＋6.0 g/L琼脂，pH5.8～6.0。 ___________________ 3 中华人民共和国广西地方标准 何首乌组培苗生产技术规程 DB45/T 1659―2017 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究