(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210682798.7 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 重庆澳龙生物制品有限公司 地址 404100 重庆市荣昌区工业园区(板桥 工业园区四支路) (72)发明人 文道鹏　刘昕　唐虎　潘小凤　 傅文伟　 (74)专利代理 机构 北京鹏帆慧博知识产权代理 有限公司 1 1903 专利代理师 祝辽原 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01) A61K 39/112(2006.01) A61P 15/06(2006.01)A61P 31/04(2006.01) C12R 1/42(2006.01) (54)发明名称 一种沙门氏菌马流产活疫苗的制备方法 (57)摘要 本发明提供了一种沙门氏菌马流产活疫苗 的制备方法， 属于兽用疫苗制备技术领域。 包括： 将马流产沙门氏菌C355弱毒菌接种于普通琼脂 斜面上进行斜面培养， 得到一级种子； 将一级种 子接种于沙门氏菌液体培养基中进行二级种子 培养， 得到二级种子； 将二级种子接种于沙门氏 菌液体培养基中进行发酵， 得到发酵液， 收集所 述发酵液中的沙门氏菌； 将得到的沙门氏菌与冻 干保护剂混合， 得到沙门氏菌马流产活疫苗。 采 用本发明的制备方法制备疫苗周期短、 生产强度 小， 安全性和免疫性要 优于原生产工艺。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 115058360 A 2022.09.16 CN 115058360 A 1.一种沙门氏菌马流产活疫苗的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)将马流产沙门氏菌C355弱毒菌接种于普通琼脂斜面上进行斜面培养， 得到一级种 子； 2)将所述步骤1)得到的一级种子接种于沙门氏菌液体培养基 中进行二级种子培养， 得 到二级种子； 3)将所述步骤2)得到的二级种子接种于沙门氏菌液体培养基中进行发酵， 得到发酵 液， 收集所述发酵 液中的沙门氏菌； 4)将所述 步骤3)得到的沙门氏菌与冻干保护剂混合， 得到 沙门氏菌马流产活疫苗。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤3)二级种子的接种量为1～ 2％。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤3)发酵的条件包括： 温度为 35～37℃， pH值为7.4～7.6， 控制溶氧在40％～80％， 溶氧下降时增加搅拌速度和通气量， 搅拌速度不高于150rmp； 从发酵第2h开始， 每隔2h补 充营养物质， 所述营养物质为质量百分 含量为50％的葡萄糖溶 液， 每次补加的量 为发酵液总体积的0.5％， 发酵的总时间为5～6 h。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤2)二级种子培养的条件包 括： 温度为3 5～37℃， 转速为15 0rpm， 培养时间为12h 。 5.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤3)收集发酵液中的沙门氏菌 采用高速冷冻管式离心机或中空纤维浓 缩系统进行收集。 6.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 当采用高速冷冻管式离心机收集沙门 氏菌时， 条件 包括： 48HZ离心速度2L/mi n， 温度为2 ～8℃。 7.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 当采用中空纤维浓缩系统收集沙门氏 菌时， 条件包括： 对整个浓缩系统进 行高压灭菌， 灭菌完成后待系统冷却， 开启动力泵， 系统 运行过程中控制中空纤维过膜压在0.1Mpa以下， 最后按浓 缩比例收集浓 缩菌液。 8.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤4)冻干保护剂中含有明胶和 蔗糖， 所述明胶的质量百分含量 为1～5％， 所述蔗糖的质量百分含量 为10～50％。 9.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述沙门氏菌马流产活疫苗中沙门氏 菌的菌含量在1 ×1010CFU/头份以上。 10.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤1)斜面培养的条件包括： 温 度为35～37℃， 时间为18～ 20h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058360 A 2一种沙门氏菌马流产活疫苗的制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于兽用疫苗制备技术领域， 尤其涉及一种沙门氏菌马流产活疫苗的制备 方法。 背景技术 [0002]马流产沙门氏菌病是由马流产沙门氏菌(Salmonella  abortus equi)引起的以马 属动物流产为特征的传染病， 只对马属动物具有致病性。 早在18世纪末19世纪初， 欧美地区 发生过大批马流产 的现象， 该病全年都可发生， 但主要发生于春秋两季， 大多数表现为散 发， 有时呈地方流行性。 马流产沙门氏菌易感染初孕马， 主要在妊娠后期流产， 多数马在发 生流产前， 一般无明显临床症状， 突 发流产， 绝大多 数为死胎， 有少数存活的胎儿， 在出生几 天后， 也会发生死亡。 妊娠母马流产时， 病原菌随流产胎儿、 胎衣、 羊水及阴道分泌物排出体 外， 患病公马可随精液排菌。 感染马流产沙门氏菌的马常常成为该菌的病原携带者， 也通常 被认为是非疫区最初的传染源。 [0003]为了防治马流产沙门氏菌病， 制 备沙门氏菌马流产活疫苗， 但是现有生产技术采 用固体培养沙门氏菌马流产活疫苗， 不控制pH、 不添加补料、 无DO控制， 接种后保持温度， 在 规定的时间收获。 存在周期长、 工作强度大、 无中间控制， 很难大规模生产。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种沙门氏菌马流产活疫苗的制 备方法， 采用 本发明的制备 方法周期短、 工作强度小， 适应于大规模生产。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种沙门氏菌马流产活疫苗的制备 方法， 包括以下步骤： [0007]1)将马流产沙门氏菌C355弱毒菌接种于普通琼脂斜面上进行斜面培养， 得到一级 种子； [0008]2)将所述步骤1)得到的一级种子接种于沙门氏菌液体培养基中进行二级种子培 养， 得到二级种子； [0009]3)将所述步骤2)得到的二级种子接种于沙门氏菌液体培养基中进行发酵， 得到 发 酵液， 收集所述发酵 液中的沙门氏菌； [0010]4)将所述步骤3)得到的沙门氏菌与冻干保护剂混合， 得到沙门氏菌马流产活疫 苗。 [0011]优选的， 所述 步骤3)二级种子的接种量 为1～2％。 [0012]优选的， 所述步骤3)发酵的条件包括： 温度为35～37℃， pH值为7.4～7.6， 控制溶 氧在40％～8 0％， 溶氧下降时增加搅拌速度和通气量， 搅拌速度不高于150rmp； 从发酵第2h 开始， 每隔2h补 充营养物质， 所述营养物质为质量百分含量为50％的葡萄糖溶液， 每次补加 的量为发酵液总体积的0.5％， 发酵的总时间为5～6 h。 [0013]优选的， 所述步骤2)二级种子培养的条件包括： 温度为35～37℃， 转速为150rpm，说　明　书 1/6 页 3 CN 115058360 A 3