ICS 65.020.20 B 62 山 DB14 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 1637—2018 萱草种苗组培快繁技术规程 2018 - 01 - 10 发布 山西省质量技术监督局 2018 - 03 - 10 实施 发 布 DB14/ T 1637—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 组织培养 .......................................................................... 2 5 炼苗和移栽 ........................................................................ 3 6 移栽后管理 ........................................................................ 3 7 病虫害防治 ........................................................................ 3 8 组培穴盘苗的质量要求 .............................................................. 3 9 包装、运输 ........................................................................ 4 附录 A（规范性附录） MS 基本培养基成分表 ............................................. 5 I DB14/ T 1637—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：山西省农业科学院园艺研究所、山西梅芝园艺有限公司。 本标准主要起草人：曹冬梅、付宝春、秦国杰、梁峥、贾民隆、段九菊、李永平、郑梅梅、张超、 宋卓琴、康红梅。 II DB14/ T 1637—2018 萱草种苗组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了萱草种苗组培快繁的术语和定义、组织培养、炼苗和移栽、移栽后管理、病虫害防治、 出苗、质量标准、包装和运输。 本标准适用于萱草组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 DB14/T 1381 萱草栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 萱草 具有观赏价值的萱草属植物的统称。 3.2 外植体 从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的原始材料。 3.3 组培苗 利用植物组织、器官等外植体，通过植物组织培养技术获得的种苗。 3.4 玻璃化 植物组培过程中出现的一种生理病变，表现为组培苗生长异常，幼叶或愈伤组织呈半透明、水浸状， 植株矮小失绿，叶片皱缩卷曲。 1 DB14/ T 1637—2018 3.5 组培穴盘苗 组培生根苗移栽在穴盘中培育的苗子。 4 组织培养 4.1 培养基配制 选用MS为基本培养基，培养基成分见附录A。 愈伤组织诱导培养基：MS + 6-BA 4mg/L + KT 0.5 mg/L + NAA0.4 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼脂6 g/L， pH 5.8。 不定芽分化和继代培养基：MS + 6-BA 1 mg/L+ KT 0.5 mg/L + NAA0.05 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼 脂6 g/L，pH 5.8。 生根培养基：1/2 MS + NAA 0.5 mg/L + 蔗糖20 g/L + 琼脂6 g/L，pH 5.8。 4.2 外植体的采集 4.2.1 采集时间 连续晴天2 d以上，上午8时～11时。 4.2.2 采集部位 在无病害的萱草种植基地，选取生长健壮、无病害的萱草植株，待花梗抽出、花苞未开放时，采集 花苞基部向下4 cm～5 cm的花梗作为外植体备用。 4.2.3 采集材料的处理 即采即用。超过1 h需用湿润的毛巾或滤纸包裹，然后置于温度为0 ℃～4 ℃的冰壶或冷藏室中保 存，保存时间不超过24 h。 4.3 外植体灭菌消毒 4.3.1 预处理 自来水冲洗外植体表面，A)将材料放入烧杯中，用0.7 g/L洗洁精水溶液浸泡5 min～10 min，B) 用自来水流动冲洗30 min，C)蒸馏水清洗3～4次，将材料取出放置于无菌干燥滤纸上，吸干表面水分置 于超净台上。 4.3.2 灭菌消毒 在超净工作台上，用浓度为75 %的酒精表面消毒30 s，再在质量体积百分比浓度为0.1 %氯化汞溶 液中灭菌12 min，无菌水冲洗干净，无菌滤纸吸干表面水分，用消毒刀片切去外部变褐的部分。 4.4 接种和愈伤组织诱导 将花梗切成1 cm的切段作为外植体材料接入到愈伤组织诱导培养基中，培养温度25 ℃，暗培养30 d 后生成愈伤组织。 4.5 不定芽的分化和继代培养 2 DB14/ T 1637—2018 将得到的愈伤组织接种于分化培养基上进行不定芽的诱导，诱导出的丛生芽在分化培养基上继代增 殖两次，获得丛生芽。培养条件为温度23 ℃～25 ℃，光照强度3 000 Lx，光照时间16 h/d。继代次数 不超过6次。 4.6 生根培养 将继代培养的丛生芽在无菌超净台上接种到生根培养基中，培养条件为温度25 ℃，光照强度3 000 Lx，光照时间16 h/d。 5 炼苗和移栽 5.1 组培苗标准 组培苗粗壮、挺直，叶片3～5片，色泽正常，具有原品种特性，无玻璃化；根系1～3条根，根长2 cm～ 3 cm或5～6条短根，根长1 cm～2 cm，色白健壮；同一批次90 %以上的苗高度整齐，约4 cm～6 cm，培 养基无污染。 5.2 基质 基质要求排水透气性强、固定性好、肥力高。可以选用泥炭、珍珠岩混合基质（体积比4：1），泥 炭纤维度20 mm～45 mm，pH值6.0～7.0。 5.3 容器规格 72孔育苗穴盘，穴盘的尺寸为54 cm×28 cm。 5.4 环境要求 具备防雨、遮阴的育苗大棚，温度20 ℃～30 ℃，空气湿度≥ 70 %。 5.5 移栽方法 将瓶苗瓶口打开移到温室内炼苗，一般需当日炼苗完毕，以免污染，影响成活率。组培苗出苗时， 将根部培养基清洗干净，然后用50 %多菌灵可湿性粉剂600倍液对组培苗进行蘸根杀菌处理，栽植到栽 培基质中，轻压根部。 6 移栽后管理 移栽后管理按照DB14/T 1381执行。 7 病虫害防治 病虫害防治按照GB/T 8321（所有部分）和NY/T 2306执行。 8 组培穴盘苗的质量要求 植株整齐健壮，苗高8 cm～10 cm，叶片数5～6片，根系完整且发达，变异率低于5%，无其他病虫 害的危害症状。 3 DB14/ T 1637—2018 9 包装、运输 9.1 包装 9.1.1 组培苗包装 组培苗保留在培养瓶中，将培养瓶放在泡沫箱里，箱外再用纸箱包装。 9.1.2 穴盘苗包装 穴盘苗装在小纸箱内，再将小纸箱装在大纸箱中，每箱装3～4个穴盘。 箱体上要带有透气孔，在包装箱上贴上标签，注明品种、数量、规格、生产单位和日期。 9.2 运输 装车时切勿倒置，运输时避免日晒雨淋，运输过程温度保持在16 ℃～20 ℃。 4 DB14/ T 1637—2018 AA 附 录 A （规范性附录） MS 基本培养基成分表 表A.1给出了MS基本培养基成分一览表。 表 A.1MS 基本培养基成分表 化合物 数量 （g） 蒸馏水定容量 （ml） 配制1L培养基需母液量 （ml） NH4NO3 16.5 KNO3 19.0 KH2PO4 1.7 1 000 100 MgSO4 .7H2O 3.7 CaCl2 。2H2O 4.4 FeSO4 0.557 Na2-EDTA 0.754 100 5 KI 0.083 Na2MoO4 .2H2O 0.025 CoCl2 。6H2O 0.0025 CuSO4 .5H2O 0.0025 100 1 MnSO4 .4H2O 2.23 ZnSO4 .7H2O 0.86 H3BO3 0.62 D VB1 0.004 100 10 E VB6 0.005 100 10 F 甘氨酸 0.02 100 10 G 烟酸 0.005 100 10 肌醇 1.0 100 10 蔗糖 30.0 琼脂 7.0 母液 A B C 直接加入 注：1、A为大量元素；B为铁盐；C为微量元素；D～H为有机成分。 _________________________________ 5