ICS 65.120 B 16 山 DB14 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 1613—2018 大豆种质资源抗胞囊线虫病鉴定技术规程 2018 - 01 - 10 发布 山西省质量技术监督局 2018 - 03 - 10 实施 发 布 DB14/ T 1613—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 材料准备 .......................................................................... 1 4 鉴定方法 .......................................................................... 2 5 调查 .............................................................................. 2 6 抗性评价 .......................................................................... 2 7 重复鉴定 .......................................................................... 3 附录 A（规范性附录） 调查用表 ............................................................................. 4 附录 B（资料性附录） .................................................................. 5 I DB14/ T 1613—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：山西省农业科学院农作物品种资源研究所。 本标准主要起草人：张海平、王志、陈妍。 II DB14/ T 1613—2018 大豆种质资源抗胞囊线虫病鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了大豆种质资源抗胞囊线虫鉴定的术语和定义、材料准备、鉴定方法、调查和抗性评价。 本标准适用于大豆种质资源抗胞囊线虫抗性鉴定和抗性评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 大豆胞囊线虫病 由病原物大豆胞囊线虫（Heterodera Glycines Ichinode）感染引起的土传病害，其主要症状为叶 片变黄，发育不良，植株矮小，开花少，结荚少甚至不结荚。大豆根系根瘤数明显减少，且不发达。在 感病初期，根系附着白色、黄褐色小颗粒，后期根系开始腐烂，导致地上部分枯死。一般造成产量损失 5%～10%，严重地块减产达30%以上，甚至颗粒无收。 2.2 生理小种 简称为“小种”，在形态上相似而在培养性状、生理、生化、病理（致病力）或其他特性上有差异 的生物型或生物群型。 2.3 鉴别寄主 用于鉴别病原物生理小种（菌系、毒系）的抗病性不同的一套寄主植物品种。 3 材料准备 3.1 塑钵制备 将厚度0.1 mm的透气性塑料膜裁为宽26 cm，高22.5 cm的小块，用订书机将其制成宽11 cm，高22 cm 的袋状塑料钵。 3.2 试验病土制备 根据试验需要在病圃取适量的病土（大豆胞囊线虫密度≥30个胞囊/100 g风干土），将病土与无菌 20目细沙以2:1的比例充分混匀后制备成试验病土。 1 DB14/ T 1613—2018 4 鉴定方法 4.1 田间病圃法 选择大豆胞囊线虫密度≥30个胞囊/100 g风干土的病圃，当气温大于20 ℃时播种。穴播，行距50 cm， 株距13 cm。每份材料播种10穴。每穴留苗1株。每30个材料设1个感病对照。同时种植1套生理小种鉴别 材料。 4.2 病土塑钵法 将试验病土装入塑钵至距钵口1 cm处。然后将装好土的塑钵依次装入塑料箱中，放于温室。将塑料 钵中土壤浇透，待钵内土壤干湿程度适宜后开始播种。每钵留苗3粒种子，表面覆盖病土1 cm。出苗后 每钵留苗2株，每个品种3个重复。每30个材料设1个感病对照。同时种植1套生理小种鉴别材料，随机摆 放。温室温度保持在25 ℃～30 ℃，含水量控制在50% ～ 60%。 4.3 人工接种鉴定法 试验在温室中进行。将待鉴定的种质在育苗盘中育苗，同时播种小种鉴别材料。将出苗后子叶展开、 根系发达、健壮一致的植株移栽到装有灭菌沙土的塑钵中，每钵2株，三次重复。每30个材料设1个感病 对照。提前在病土中种植感病品种，在胞囊显盛期，将根系上的胞囊冲洗下来，制备成浓度为1 000个 /mL的卵悬浮液。待鉴定材料在移栽后3天接种卵悬浮液2 mL。温室温度保持在25 ℃～30 ℃，含水量控 制在50% ～ 60%。 5 调查 待感病对照白色胞囊突破根系表皮时即可调查。将待调查植株根系上的土轻轻抖掉或用水冲洗干 净、晾干，统计其根上的胞囊数。鉴定调查表格见附录A。 6 抗性评价 6.1 生理小种鉴别 大豆胞囊线虫生理小种划分具体见附录B。 6.2 鉴定有效性评价 感病对照Lee根系上的胞囊数应在30.0个以上，抗性级别达高感，视为该次鉴定有效。 6.3 抗性级别划分 根据根系平均胞囊数进行抗性级别划分，划分依据见表1。 2 DB14/ T 1613—2018 表1 大豆对胞囊线虫的抗性级别划分依据 抗性级别 抗性类别 胞囊数与症状 0 免疫（I） （根系胞囊数为 0，植株生长正常） 1 高抗（HR） （0＜根系胞囊数≤3.0，植株正常生长） 3 抗（R） （3.0＜根系胞囊数≤10.0，植株生长基本正常或部分矮黄） 7 感（S） （10.0＜根系胞囊数≤30.0，植株矮小，叶片发黄、结实少） 9 高感（HS） （根系胞囊数＞30.0，植株不结实，干枯死亡） 7 重复鉴定 当鉴定结果为抗或高抗时（抗性级别划分依据见表1），应进行重复鉴定确定其抗性。若重复鉴定 结果有差异，以抗性级别低的结果为准。确定抗性后，将抗性品种移栽。 3 DB14/ T 1613—2018 A A 附 录 A （规范性附录） 调查用表 大豆抗胞囊线虫鉴定调查表见表A.1。 表A.1 年大豆抗胞囊线虫鉴定调查汇总表 播种日期： 鉴定 品种 出苗 留苗 调查 编号 名称 期 数 日期 4 胞囊数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均胞囊数 抗性评价 DB14/ T 1613—2018 B B 附 录 B （资料性附录） 生理小种鉴别 B.1 生理小种鉴别模式 大豆胞囊线虫生理小种的鉴别有两种模式，一种为传统的Riggs鉴别模式，共4份材料，分别为 Pickett、Peking、PI88788、PI90763，根据寄主根系平均胞囊指数来确定大豆胞囊线虫小种；一种为 HG分类系统，辅助鉴别线虫是否变异，共7份材料，分别为PI548402、PI88788、PI90763、PI437654、 PI209332、PI89772、PI548316。根据寄主根系平均胞囊数计算胞囊指数（FI）。 大豆胞囊线虫生理小种Riggs鉴别模式见表B.1。 表B.1 大豆胞囊线虫生理小种 Riggs 鉴别模式 鉴别寄主 小种类型 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Pickett - + - + + + - - + + - - - + + - Peking - + - + - - - - + - + + + + - + PI88788 + + - + - + - - - + - - - + + PI90763 - - -- + - + + - + - + - + + + - 注：“+”表示FI大于等于10%；“-”表示FI小于10%。 大豆胞囊线虫生理小种HG鉴别模式见表B.2。 表B.2 大豆胞囊线虫生理小种 HG 鉴别模式 HG 分型 鉴别寄主 0 1 2 3 4 5 6 7 Pickett Peking + PI88788 PI90763 PI437654 PI209332 PI89772 PI548316 + + + + + + 注：“+”表示大于等于Lee寄生胞囊量的10%。 5 DB14/ T 1613—2018 B.2 生理小种鉴别方法 按照表B.1和表B.2划分标准确定生理小种。 FI=（供试品种胞囊数/感病对照胞囊数）×100%； a _________________________________ 6