ICS 65.020.20 B 05 DB 14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/T 1509—2017 玉米镰孢茎腐病抗性鉴定圃种植及接种技 术规程 2017 - 12 - 10 发布 山西省质量技术监督局 2018 - 02 - 10 实施 发 布 DB 14/T 1509—2017 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 病圃种植方法 ...................................................................... 2 5 菌种分离 .......................................................................... 2 6 菌种培养及繁殖 .................................................................... 2 7 接种 .............................................................................. 3 8 管理 .............................................................................. 3 9 调查记载 .......................................................................... 3 10 抗性评价 ......................................................................... 3 附录 A（资料性附录） 玉米镰孢茎腐病病原 .............................................. 5 附录 B（资料性附录） 玉米镰孢茎基腐病抗性鉴定对照材料 ................................ 6 I DB 14/T 1509—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西农业大学提出并归口。 本标准起草单位：山西农业大学农学院。 本标准主要起草人：张作刚、王建明、姚艳平、贺冰、王美琴、郝晓娟、韩彦卿、张光明。 II DB 14/T 1509—2017 玉米镰孢茎腐病抗性鉴定圃种植及接种技术规程 1 范围 本标准规定了玉米镰孢茎腐病抗性鉴定病圃的种植方法、菌种分离、菌种培养及繁殖、接种、管理、 调查记载及抗性评价。 本标准适用于栽培玉米（Zea mays L.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米 近缘种对玉米镰孢茎腐病抗性的田间鉴定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1248.7 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第7部分：镰孢茎腐病 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 玉米镰孢茎腐病 主要由禾谷镰孢[Fusarium graminearum Schwabe]，有性态为玉蜀黍赤霉[Gibberella zeae Schwein (Petch)] 所引起的根系和茎基腐烂的玉米病害。 3.2 抗性鉴定 通过适宜技术方法鉴别植物对其特定侵染性病害的抵抗水平。 3.3 分离物 采用人工方法分离获得的病原体的纯培养物。 3.4 致病性 病原体侵染寄主植物引起发病的能力。 3.5 1 DB 14/T 1509—2017 接种 在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位。 4 病圃种植方法 4.1 病圃小区面积 每小区4 m2~5 m2，每个材料种1小区，重复2次。 4.2 种植密度 鉴定材料按正常玉米种植密度的2倍种植。 4.3 宽窄行种植 每小区行长4 m ~5 m，宽行距0.6 m，窄行距0.4 m，株距25 cm ~30 cm，每穴种3~4粒。每个材料种 2窄行，材料间宽行。材料按生育期长短分组排列，每50～100份鉴定材料设1组已知高抗和高感对照材 料。 4.4 留苗 通过间苗、定苗后，每穴留2株。 5 菌种分离 以常规组织分离法或单孢分离法从发病植株茎基部分离茎腐病病原物。分离物经鉴定确认为禾谷 镰孢（F. graminearum Schwabe）后，进行单孢分离物纯化，经致病性测定后，在4 ℃低温下保存备用。 6 菌种培养及繁殖 6.1 菌种培养 将菌种接种于PDA平板或液体培养基中，25 ℃左右条件下培养7 ~10 d，菌种长满培养基后待用。 6.2 玉米粒菌种繁殖 将玉米粒清洗浸泡1 d吸足水后，装入灭菌袋中，然后放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌1 h。冷却后，将 6.1平板培养的菌种用接种针划碎后用接种针接入或液体菌种直接倒入经高压灭菌的玉米粒上，每1 kg 玉米粒接种1/2~1平板菌种（直径9 cm培养皿）或5 mL~10mL液体菌液。混均后，在23 ℃~25 ℃下黑暗 培养。培养5~7 d后，菌丝布满玉米粒。 6.3 牙签菌种繁殖 6.3.1 泡煮牙签 将牙签在清水中浸泡1 d，然后在清水中煮20 min~30 min后，冲洗2~3次。 6.3.2 渗沾面粉 2 DB 14/T 1509—2017 将经过泡煮的牙签在PDA液体培养基中煮20 min~30 min后，捞出趁表面湿润时在含有1%琼脂粉的 小麦粉中沾拌，使牙签表面沾有一层面粉，把表面沾有面粉的牙签放进菌袋（简称牙签菌袋）。 6.3.3 高压灭菌 在三角瓶中装入麦粒，加水浸泡，待吸足水后，冲洗后淋去水分，加塞，连同牙签菌袋一同高压灭 菌20 min。 6.3.4 牙签接种 灭菌冷凉后，把6.1培养的菌种先倒入三角瓶的麦粒中，混匀后，再将带菌的麦粒倒入牙签菌袋中， 轻轻上下左右翻动菌袋，使带菌麦粒充分和牙签接触并均匀分散于其中。 6.3.5 牙签培养 将接种的牙签菌袋于25 ℃恒温下培养7 ~10 d，菌种长满牙签即可。 7 接种 7.1 接种时间 在玉米心叶末期（或10~13片叶展开）至抽雄初期。 7.2 接种方法 7.2.1 埋根法 接种时将玉米根系一侧土壤扒开，将病原菌培养物20 g~30 g接种在露出的根系处，接种后覆土。 7.2.2 打孔法 在玉米茎基部紧贴地面处，用直径3mm的钻头或锥子打孔，然后将带菌牙签插入孔中。 8 管理 鉴定接种前应先进行田间浇灌或在雨后进行接种，接种后若遇持续干旱，应及时进行浇水，满足病 害发生所需的湿度条件。 9 调查记载 在玉米进入乳熟后期进行调查。用手指捏近地表茎节，感到变软的植株即为发病植株。分别记录调 查总株数、发病株数，计算并记录发病株率。 10 抗性评价 依据鉴定材料发病率确定其病情分级，再依据病情级别确定其抗性水平，见表1。当设置的感病或 高感对照材料达到其相应感病程度，该批次鉴定视为有效。重复抗性鉴定结果以记载的最高病情级别为 准。 3 DB 14/T 1509—2017 表1 玉米镰孢茎腐抗病鉴定病情级别划分及抗性评价标准 病情级别 4 描 述 抗 性 1 发病株率 0%～1.0% 高抗 Highly resistant （HR） 3 发病株率 1.1%～5.0% 抗 Resistant （R） 5 发病株率 5.1%～10.0% 中抗 Moderately resistant （MR） 7 发病株率 10.1%～40.0% 感 Susceptible （S） 9 发病株率 40.1%～100% 高感 Highly susceptible （HS） DB 14/T 1509—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 玉米镰孢茎腐病病原 A.1 学名 禾谷镰孢：Fusarium graminearum 异名：Botryosphaeria saubinetii Dichomera saubinetii Dothidea zeae Fusarium roseum Gibbera saubinetii Gibberella roseum Gibberella saubinetii Sphaeria saubinetii Sphaeria zeae A.2 形态 分生孢子呈镰孢形，有隔膜2-7个，顶端钝圆或略微收缩，基部有明显的足细胞，大型分生孢子， 分隔明显，多数有3个隔膜，大小为3～6 mm×24～28 mm。小型分生孢子极少或没有，无厚垣孢子。 5 DB 14/T 1509—2017 BB 附 录 B （资料性附录） 玉米镰孢茎基腐病抗性鉴定对照材料 B.1 鉴定对照材料 抗性鉴定采用的对照材料为2个自交系：齐319（高抗）、掖478（高感）。 _________________________________ 6