ICS 65.020.20 B 05 备案号： 湖 DB42 北 省 地 方 标 准 DB42/T 1257—2017 蓝莓组织培养育苗技术规程 Technical regulations for in vitro propagation of blueberry (报批稿) 2017 -04-12 发布 湖北省质量技术监督局 2017-06-01 实施 发 布 DB42/T 1257—2017 目 次 前言 ................................................................................ Ⅲ 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 外植体的采集与处理 ................................................................ 1 4.1 4.2 4.3 4.4 5 母株的选择 .................................................................... 外植体采集 .................................................................... 外植体的标记与运输 ............................................................ 外植体消毒 .................................................................... 1 1 2 2 蓝莓组织培养 ...................................................................... 2 5.1 初代培养 ...................................................................... 2 5.2 继代培养 ...................................................................... 2 5.3 壮苗培养 ...................................................................... 2 6 生根培养 .......................................................................... 3 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 7 生根设施 ...................................................................... 生根基质 ...................................................................... 扦插时间 ...................................................................... 扦插炼苗 ...................................................................... 扦插 .......................................................................... 3 3 3 3 3 扦插后的管理 ...................................................................... 3 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 温度 .......................................................................... 光照 .......................................................................... 湿度 .......................................................................... 施肥 .......................................................................... 病虫害防治 .................................................................... 3 3 3 3 3 8 移栽 .............................................................................. 3 9 出圃 .............................................................................. 4 10 包装、标志、运输和贮存 ........................................................... 4 10.1 包装 ......................................................................... 4 10.2 标志 ......................................................................... 4 10.3 运输 ......................................................................... 4 10.4 贮存 ......................................................................... 4 附录A（资料性附录） 蓝莓茎段组织培养的培养基配方 .................................. 5 I DB42/T 1257—2017 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构与编写》 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖北省农业科学院提出。 本标准由湖北省农业科学院归口管理。 本标准起草单位：湖北省农业科学院果树茶叶研究所、湖北省鑫民生态农业开发有限公司。 本标准起草人：秦仲麒、涂俊凡、李先明、杨夫臣、伍涛、朱红艳、刘政、叶小伍。 II DB42/T 1257—2017 蓝莓组织培养育苗技术规程 1 范围 本标准规定了蓝莓组织培养育苗外植体的采集与处理、蓝莓组织培养、生根培养、扦插后的管理、 移栽、出圃以及包装、标志、运输和贮存。 本标准适用于湖北省蓝莓主栽品种组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 蓝莓组培苗 buleberry tissue cultured plantlets 利用蓝莓芽或带芽茎段作为外植体，采用组织培养技术生产的苗木。 3.2 蓝莓外植体 blueberry explants 用于蓝莓无菌培养的器官或组织，如一年生嫩枝。 3.3 壮苗培养 strong seedling culture 将增殖的蓝莓丛芽剪成单芽茎段接种到壮苗培养基中培养使其长高长粗。 4 外植体的采集与处理 4.1 母株的选择 选取生长健壮和无病虫害的蓝莓作为外植体采集的母株。 4.2 外植体采集 4.2.1 采集时间 4 月-7 月份晴天午后或叶片表面露水干后采集外植体。 4.2.2 采集方法 1 DB42/T 1257—2017 剪取生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并留1 mm～2 mm叶柄。 4.3 外植体的标记与运输 采集外植体时，应对每个母株的外植体加标签，标明母株名称、采集地点及采集时间等。采集的外 植体宜当天进行消毒处理。若需要长途运输或储藏2 d～3 d，宜用保湿材料包扎。 4.4 外植体消毒 用洗洁精将外植体清洗干净，流水冲洗10 min～20 min。在超净台上，将外植体剪成4 cm～5 cm的 茎段，用75%酒精浸泡处理10 s～30 s，无菌水冲洗3次，再用0.1% 砷汞溶液消毒6 min～8 min，无菌水 冲洗5次，无菌滤纸吸干水分。 5 蓝莓组织培养 5.1 初代培养 5.1.1 接种与转接 用无菌的手术刀和镊子将嫩枝均匀分割成0.5 cm～0.8 cm的小段，接种于无菌的诱导培养基上。首 次接种5 d～7 d应将外植体转接到新鲜的初代培养基上，35 d～45 d嫩芽长出后继代增殖培养。 5.1.2 培养条件 25℃±2℃。黑暗培养7 d后，转入光照培养。光照时间每天12 h～16 h，同一培养层内底部光照强度 20μmol·m-2·s-1～40μmol·m-2·s-1。 5.2 继代培养 5.2.1 转接 将培养材料及时转接到新鲜的增殖培养基中，把嫩茎剪成 1cm 左右的茎段，插入新鲜的增殖培养基 中。污染、玻璃化的增殖苗均应废弃，其中污染苗应杀菌后再废弃。 5.2.2 培养条件 25℃±2℃。光照时间每天12 h～16 h，光照强度20μmol·m-2·s-1～40μmol·m-2·s-1。 5.2.3 培养周期 培养周期为40 d～60 d。 5.2.4 增殖