ICS 65.020 B30 DB32 备案号：13456-2003 江苏省地方标准 DB32/T 574-2003 呋丹残留量的酶联免疫检测方法 Determination of Carbofuran Residues by Enzyme-linked Immunosorbent Assay 地方标准信息服务平台 2003-04-08发布 2003-06-01实施 江苏省质量技术蓝督局发布 DB32/T574-2003 前言 本标准在制定过程中主要参考了GB/T149331994《小麦中T一2毒素的酶联免疫吸附测定方法 (ELISA)》 本标准的编写格式依据GB/T1.1一2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》编制。 本标准由江苏省农业科学院、江苏省产品质量监督检验中心所提出并起草。 本标准主要起草人：刘贤进、余向阳、颜春荣、廖海丰。 地方标准信息服务平台 DB32/T574-2003 陕喃丹残留量的酶联免疫检测方法 1范围 本标准规定了呋腩丹残留量酶联免疫检测方法的原理、试剂或材料、设备、分析步骤和结果计算。 本标准适用于农产品中呋喃丹残留量的酶联免疫检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T14933-1994小麦中T一2毒素的酶联免疫吸附测定方法（ELISA） 3原理 本标准采用间接竞争性酶联免疫检测（ELISA）方法，其原理是：将一定浓度包被抗原吸附在固相 载体表面，洗去未吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品提取液（含游离抗原）的混合液，使包被抗原 和待测样品中抗原与抗体进行竞争免疫结合反应，在固相载体表面形成抗原一抗体复合物。然后加入酶 标记的抗抗体球蛋白的第二抗体（SPA）结合物，使在酶标板上形成包被抗原-抗体-SPA-酶复合物，再 加入酶的底物。在酶的催化作用下，底物发生降解反应，产生有色产物，用酶标仪测定样品的光吸收值， 与标准品作比较，测定底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。 4试剂 4.1本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水为去离子水。 4.2无水硫酸钠：于450℃焙烧4h后备用。 4.3丙酮、二氯甲烷、无水甲醇：重蒸。 4.4石油醚：沸程30℃～60℃，重蒸。 4.55%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用水溶解并定容至500mL。 4.61 包被抗原：呋喃丹人工半抗原与卵清蛋白（OVA）的偶联物。 4.7 封闭液：1%卵清蛋白（0OVA）的PBS溶液（1g卵清蛋白溶解于100mLPBS缓冲液中）。 4.8 抗体：免抗呋喃丹单克隆或多克隆抗体。（溶解稀释后4℃下保质期为1个月）。 4.9 酶联葡萄球菌A蛋白（HRP～SPA）：工作浓度1：40。（4℃下保质期为1年）。 4.10四甲基联苯胺（TMB）。 4.1130%过氧化氢（H202）。 5ELISA缓冲液系统 5.1包被缓冲液为pH9.6的碳酸盐缓冲液 称取1.59碳酸钠（NazCO：），2.93g碳酸氢钠（NaHCO.），加水稀释至1000ml。 5.2洗液为含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS-T） 称取磷酸氢二钠（NazHPO.·12H20）2.9g，磷酸二氢钾（KH.PO.）0.2g，氯化钠（NaC1）8.0g，氯化 钾（KC1）0.2g，吐温-200.5ml，加水至1000ml。 5.3底物缓冲液为pH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液 1