CS T / NAIA 团 体 标 准 T/NAIA 0314-2024 枸杞中维生素C和2-O-β-D-葡 萄糖基-L-抗坏血酸的测定 高效 液相色谱法 Determination of vitamin C and 2-O-β-d-glucosyl-l-ascorbic acid in Lycium barbarum ． —High performance liquid chromatography 2024-10-02发布 2024-10- 20实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 ICS 65.020.01 CCS A 017 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0314-2024 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则 》 的规定起草 。 本文件由宁夏 回族自治区 药品检验研究院提出 。 本文件由宁夏 化学分析测试协会归口 。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心（ 宁夏））、宁夏卫生健康职业技术学院 、中国科学院兰州化学物理研究所 、宁夏回族自治区药 品质量控制与评价重点实验室、宁夏农林科学研究院。 本文件主要起草人： 王宁、尚博扬、马玲、撖志明、肖哲丽、王宁霞、朱会琴、吴聪、 武奕融、王振波、刘潇然、刘建飞、郑国保、王英华、马宗卫。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0314-2024 1枸杞中维生素 C和2-O-β-D-葡萄糖基 -L-抗坏血酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞干果、鲜果及原浆 中维生素 C和2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸含量 的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于枸杞干果、鲜果及原浆 中维生素 C和2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸含量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的维生素 C和2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸 经2.0%偏磷酸溶液在酸性条件下提 取，高效液相色谱法测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除另有说明外， 在分析中使用分析纯试剂和 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.2 磷酸(H3PO 4)：优级纯， 85%。 5.3 四丁基溴化铵 (C16H36BrN)。 5.4 偏磷酸(HO 3P)。 5.5 20%甲醇溶液： 量取 200 mL甲醇，用水定容至 1 000 mL。 5.6 20 mmol/L磷酸溶液：准确量取 1.4 mL磷酸，加水稀释至 1 000 mL后，混匀，用0.45 µm 滤膜过滤，备用。 5.7 5 mmol/L四丁基溴化铵溶液 ：准确称取 1.61 g四丁基溴化铵 ，用水溶解并定容至 1 000 mL 容量瓶中， 用0.45 µm滤膜过滤，备用。 5.8 2.0%偏磷酸溶液： 准确称取 10.0 g偏磷酸， 用水溶解并稀释至 500 mL，混匀，备用。 5.9 维生素 C (C6H8O6，CAS号：50-81-7)、2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸 (C12H18O11，CAS 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0314-2024 2号： 562043-82-7) 。 5.10 标准储备溶液 分别精密称取维生素 C、2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸 标准品 10 mg（精确至 0.01 mg） 于10 mL容量瓶中， 加2.0%偏磷酸溶液（ 5.8）溶解并定容， 分别配置成 1 000 μg/mL的标 准储备溶液，贮存于密闭棕色容量瓶中， 于4℃下储存。 5.11混合标准中间溶液 分别吸取维生素 C和2-O-β-D- 葡萄糖基 -L-抗坏血酸标准储备溶液适量 ，用2.0%偏磷酸 溶液（5.8）稀释成400 μg/mL的混合标准储备溶液 ，贮存于密闭棕色容量瓶中 ，于4℃下储 存。 5.12 标准曲线的绘制 精密吸取 5.11项下混合标准储备溶液 0.05 mL、0.1 mL、0.25 mL、1.0 mL、2.5 mL、 5.0 mL、10.0 mL分别置 10 mL的容量瓶中， 用2.0%偏磷酸溶液（ 5.8）稀释至刻度，摇匀， 即得浓度分别为 2.0、4.0、10.0、40.0、100.0、200.0、400.0 μg/mL的系列混合标准使用溶 液。取上述系列溶液按 8.1项下的色谱条件进行测定，记录峰面积，以对照品溶液浓度（ C） 为横坐标，峰面积（ A）准为纵坐标，绘制标准曲线。 5.13 0.45 μm滤膜，有机相。 5.14 0.45 μm滤膜，水相。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。 6.2 分析天平， 感量 0.000 01 g。 6.3 分析天平， 感量 0.000 1 g。 6.4 涡旋混合器。 6.5 超纯水机。 6.6 粉碎机， 转速不低于 10 000 r/min。 6.7 破壁机， 转速不低于 10 000 r/min。 6.8 超声波清洗器。 7 样品前处理 7.1 试样制备 7.1.1 枸杞干果样品于 -18 ℃冷冻冰箱中保存 。试验时将枸杞干果样品取出 ，用高速万能粉 碎机（可加少量的液氮 ）粉碎（30 g样品粉碎时间为 30 s），分别置于样品瓶中 ，-18 ℃冷冻 全国团体标准信息平台