ICS 65.020.01 CCS A 017 T / NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0316 -2024 枸杞原浆中类胡萝卜素的测定 高效液相色谱法 Determination of carotenoids in Wolfberry Pulp —High performance liquid chromatography 2024-10-02发布 2024-10-20实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则起草。 本文件由宁夏 回族自治区 药品检验研究院提出 。 本文件由宁夏 化学分析测试协会归口 。 本文件起草单位： 宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心（宁夏） ）、 中国科学院兰州化学物理研究所、宁夏回族自治区食品检测研究院、宁夏回族自治区药品质量控制与 评价重点实验室。 本文件主要起草人： 陈欢、马玲、撖志明、王宁丽、黄钰馨、姜文霞、吕毅、臧娅妮、孙莹、朱 捷、刘淑瑛、马玉霞、平吉文、刘潇然、杨磊、马宗卫。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0316-2024 1枸杞原浆中类胡萝卜素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞原浆中类胡萝卜素成分的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于枸杞原浆中类胡萝卜素 成分：玉米黄质 、β-胡萝卜素 、β-隐黄素棕榈酸酯 、 玉米黄素双棕榈酸酯含量的测定 ，其他枸杞制品中类胡萝卜素含量的测定也可以参考本方法 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要规定的术语和定义。 4 原理 试样中类胡萝卜素成分采用二氯甲烷提取 ，用0.1%BHT无水乙醇溶液稀释并定容 ，微 孔滤膜过滤，高效液相色谱法测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1 无水乙醇（ C2H5OH）：色谱纯。 5.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.3 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.4 二氯甲烷（ CH 2Cl2）：色谱纯。 5.5 0.1%BHT 无水乙醇溶液： 称取 0.1 g 二丁基羟基甲苯（ BHT），以100 mL无水乙醇溶 解，混匀。 5.6 玉米黄质（ zeaxanthin ，CAS号144-68-3 ）； β-胡萝卜素（ β-carotene ，CAS 号 7235-40-7 ）； β-隐黄素棕榈酸酯（ β-cryptoxanthin palmitate，CAS号6081-47-6 ）；玉米黄素双棕榈酸酯 （zeaxanthin dipalmitate ，CAS号144-67-2）。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0316-2024 25.7 标准溶液配制 5.7.1 标准储备液 避光操作 。准确称取各标准品适量 ，用二氯甲烷 （5.4）溶解，分别配制成玉米黄质 、β- 胡萝卜素 浓度为 20 μg/mL、β-隐黄素棕榈酸酯 浓度为 60 μg/mL、玉米黄素双棕榈酸酯浓度 为1.6 mg/m L的标准储备液， -20 ℃下保存。 5.7.2 标准使用液 避光操作，临用新制。分别精密量取标准储备液适量，以 0.1%BHT 无水乙醇溶液 （5.6）作为溶剂，稀释制成玉米黄质、 β-胡萝卜素 浓度为 0.1~2 μg/mL、β-隐黄素棕榈酸酯 浓度为 0.3~6 μg/mL、玉米黄素双棕榈酸酯 浓度为 8~160 μg/m L的系列标准使用液， -20 ℃ 下保存。 6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱仪（配紫外检测器）。 6.2 分析天平， 感量 0.00001 g和0.01 g。 6.3 冷冻离心机： 转速不低于 4000 r/min。 6.4 涡旋混合器。 6.5 滤膜： 0.45 μm，有机相。 6.6 离心管： 50 mL。 7 分析步骤 7.1 试样提取 取枸杞原浆样品，摇匀，准确 称取 5 g（精确至 0.01 g），于50 mL离心管中，加入二 氯甲烷（ 5.4）20.0 mL，涡旋混 匀5 min，以4000 r/min离心 10 min，取下层溶液，经 0.45 μm滤膜过滤 ，弃去初滤液 ，取2 mL，置5 mL容量瓶中 ，用0.1%BHT无水乙醇 （5.6） 稀释至刻度，摇匀，待测定。 7.2 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C30色谱柱 5 μm，4.6 mm×250 mm，或性能相当者； b）柱温： 25 ℃； c）流速： 1.0 mL/min； d）进样量： 20 μL； e）波长： 450 nm； e）流动相： A相为甲醇 -乙腈 -水（ 81+14+5），B相为二氯甲烷， 梯度洗脱条件见表 1； 全国团体标准信息平台