ICS 67.160.10 CCS C 151 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0338—2024 葡萄酒中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的 测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid in wine by HPLC-MS/MS 2024-11-25发布 2024-12-01实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0338—2024 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（ 国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全） ）、吐鲁番市质量与计量检测所、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：朱燕燕、马桂娟、汤丽华、马雪梅、马利伟、宋钰、王鹏、刘竞择、王琛、 郭阳、刘继辉、吕毅、吴明、张小飞。 全国团体标准信息平台 1葡萄酒中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的高效液相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用葡萄酒中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样经甲醇 -水溶液（10+90，体积比）超声提取 ，提取液经分散固相萃取净化 ，用液相色谱 -串 联质谱仪检测，外标法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂和材料 5.1.1甲醇：色谱纯。 5.1.2乙酸铵：色谱纯。 5.1.3十八烷基硅烷键合硅胶（ C18）：粒径 40μm～60μm。 5.1.4乙二胺 -N-丙基硅烷化硅胶（ PSA）：粒径 40μm~60 μm。 5.1.5乙酸铵水溶液（ 5mmol/L）：称取 0.385g乙酸铵， 用水溶解并稀释至至 1000mL，摇匀。 5.1.6甲醇 -水溶液（ 20+80，体积比）： 量取 200mL甲醇加入 800 mL水中，混匀。 5.1.7微孔滤膜（水相）： 13 mm×0.22 μm，或相当者。 5.2标准品 苯甲酸（纯度：≥ 95%，CAS：65-85-0）、山梨酸（纯度：≥ 95%，CAS：22500-92-1 ）、脱氢 乙酸（纯度：≥ 95%，CAS：520-45-6）。 5.3标准溶液配制 5.3.1标准储备溶液（ 1.0mg/mL ）：准确称取约 10mg苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸标准品，用水溶 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0338—2024 2解并分别定容至 10mL，0～4℃避光贮存， 有效期 6个月。 5.3.2混合标准储备溶液（ 10.0μg/mL ）：吸取一定量的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸标准储备溶液 （5.3.1）于10mL容量瓶中，用水定容至刻度， 0～4℃避光贮存， 有效期 1个月。 5.3.3基质混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准储备溶液（ 5.3.2）适量，用空白样品基质溶 液配制成浓度分别为 10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、2000.0ng/mL ，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.1mg和0.01g。 6.3涡旋混合器。 6.4离心机： 转速不低于 8000r/min 。 6.5超声波震荡器。 6.6色谱柱： C18，2.1mm×100mm ，粒径 1.7μm或性能相当。 7分析步骤 7.1前处理过程 称取 5g（精确至 0.01g）葡萄酒样品于 25mL容量瓶中，加入 甲醇 -水溶液（5.1.6）20mL，超声 10min，用甲醇 -水溶液（5.1.6）定容至刻度，摇匀备用。 移取 5mL上清液， 加入至装有 50mgPSA 和100mg C18粉末的离心管中， 涡旋2min，6000r/min 离心3min，吸取上清液过微孔滤膜（ 5.1.7） 后供液相色谱 -串联质谱仪测定。 7.2仪器参考条件 7.2.1液相色谱参考条件 a）柱温： 30℃。 b）流动相： A相为 5mmol/L 乙酸铵水溶液（ 5.1.5）， B相为甲醇（ 5.1.1）；梯度洗脱见表 1。 c）流速： 0.3mL/min 。 d）进样量： 5μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.3 90 10 2.00 0.3 90 10 3.00 0.3 20 80 5.00 0.3 20 80 5.01 0.3 90 10 8.00 0.3 90 10 7.2.2质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源（ ESI）。 b）扫描方式：负离子扫描。 全国团体标准信息平台