ICS 65.020 CCS A 017 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 0347-2024 黄芪中7种黄酮类物质含量的测定 高效液相色谱法 Determination of 7 flavanoids in astragalus High performance liquid chromatography 2024-12-12发布 2024-12-31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布T/NAIA 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0347-2024 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏 化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：刘霞、王晓菁、赵子丹、牛艳、石欣、杨静、吴燕、李彩虹、杨春 霞、苟春林、张锋锋、王彩艳、陈翔、开建荣、张学玲、张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0347-2024 1黄芪中7种黄酮类物质含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了黄芪中黄酮类物质的液相色谱测定方法。 本文件适用于黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷 、槲皮苷、木樨草苷 、山奈酚 -3-O-芸香糖苷 、 金丝桃苷、芒柄花苷和芒柄花黄素的液相色谱法测定。 本文件的方法检出限：毛蕊异黄酮葡萄糖苷 、金丝桃苷、芒柄花黄素的方法检出限 为 0.075 mg/kg，槲皮苷、木樨草苷、山奈酚 -3-O-芸香糖苷、芒柄花苷的方法检出限 为 0.15mg/kg 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要规定的术语和定义。 4 原理 试样中的黄酮类物质经甲醇超声提取 ，旋蒸近干 ，甲醇定容 ，微孔滤膜过滤 ，液相色谱 仪检测和确证，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。 5.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 5.3 磷酸（ H3PO 4）： 分析纯。 5.4 毛蕊异黄酮葡萄糖苷（ Calycosin-7-glucoside ，CAS号20633-67-4 ，纯度≥ 98%）、槲 皮苷（ quercitrin ，CAS号522-12-3 ，纯度≥ 98%）、木樨草苷（ cynaroside ，CAS号 5373-11-5 ，纯度≥ 98%）、山奈酚 -3-O-芸香糖苷（ kaempferol-3-O-rutinoside ，CAS号 17650-84-9 ，纯度≥ 98%）、金丝桃苷（ Hyperoside ，CAS号482-36-0，纯度≥ 98%）、芒 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0347-2024 2柄花苷（ Ononin，CAS号486-62-4，纯度≥ 98%）和芒柄花黄素（ formononetin ，CAS号 485-72-3，纯度≥ 98%）的液相色谱法测定。 5.5 标准储备溶液：分别准确称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、山奈酚 -3-O- 芸香糖苷 、金丝桃苷 、芒柄花苷和芒柄花黄素 标准物质 10mg（精确至 0.0001g），用甲醇溶 解并定容至 10.0mL，分别配制成 1000 mg/L的标准储备溶液， 0℃~4℃贮存。 5.6 0.1%磷酸溶液（体积分数）： 量取 1mL磷酸，用水定容至 1000mL。 5.7 微孔滤膜： 0.22 μm，有机相。 5.8 离心管： 50 mL。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.01 g和0.0001 g。 6.3 高速万能粉碎机： 10000 r/min。 6.4 超声波清洗机 。 6.5 离心机： 4000 r/min。 6.6 涡旋混合器。 6.7 旋转蒸发仪。 7 分析步骤 7.1 试样的制备 将试样去除杂质， 60℃烘箱中烘干 48h，用高速万能粉碎机粉碎，四分法分取， 过40 目筛，置于密封袋中备用。 7.2 试样的提取 平行做两份试样。称取 试样 2 g（精确至 0.01 g）于50 mL离心管， 加入 30 mL甲醇， 充分振摇混匀， 超声提取 30 min，放入离心机， 4000 r/min离心 3 min，过滤，再取残渣加 入20 mL甲醇，重复提取一次 ，合并 2次滤液，旋蒸后用甲醇定容 5mL，过0.22 μm滤膜， 待测定。同试样进行空白试验，除不称取样品外，均按试样步骤进行。 7.3 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18柱， 250 mm×4.6 mm（i.d）， 5 μm，或性能相当者； b）柱温： 40 ℃； c）流速： 0.8 mL/min； d）流动相： A相为 0.1%磷酸溶液（ 5.6）， B相为乙腈， 梯度洗脱条件见表 1； 全国团体标准信息平台