团 体 标 准 食品中胭脂红酸含量测定 (超 高效液相 -质谱/质谱法) Determination of carminic acid in food by ultra high performance liquid chromatography - tandem triple quadruple mass spectrometry 安徽省食品科学技术学会 发布T/AHFS 005 -2024 ICS 01.040.71 CCS X40/49 2024 -09-19发布 2024 -10-19实施 全国团体标准信息平台 T/AHFS 005-2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由 马鞍山市食品药品检验和 药品不良反应监测中心 提出。 本文件由 安徽省食品科学技术学会 归口管理。 本文件起草单位： 马鞍山市食品药品检验和 药品不良反应监测中心 、安徽工业 大学、安徽省食品药 品检验研究院、 纳谱分析技术 （苏州） 有限公司、岛津企业管理 （中国）有限公司、马鞍山市产品质量 监督检验所、安徽国泰众信检测技术有限公司、 安徽省金标准检测研究院有限公司 。 本文件主要起草人： 汪强、刘燕、王 双寿、程潇、张 勇、陈建立、袁月兰、陈洪周、李琦、姚杰、 张媛、曹品 品、段佳丽、王忍、余宜武 。 全国团体标准信息平台 T/AHFS 005-2024 1 食品中胭脂 红酸含量 测定(超高效液相 -质谱/质谱法) 1 范围 本文件规定了 食品中胭脂 红酸含量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法。包括原理、试剂与材料、主要 仪器和设备、分析步骤、测定、结果计算、精密度、灵敏度。 本文件适用于 烘烤食品 、肉制品、果冻 中胭脂红酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样通过盐酸 水溶液提取，经 HLB柱净化，使用超高效液相色谱进行反相分离后，再由三重四杆质 谱仪测定 ，外标法定量。 4 试剂与材料 水为 GB/T 6682 规定的一级水 。以下凡是无特殊注明的试剂均为分析纯。 4.1 盐酸(HCl)。 4.2 甲醇 (CH 3OH)：质谱纯。 4.3 石油醚 (30~60 ℃)。 4.4 胭脂红酸：纯度≥99.5%。或市售有证标准物质。 标准品信息参见附录 A。 4.5 盐酸水溶液 (2 mol/L)：量取 168 mL盐酸至 800 mL水中，混匀后，移入 1000 mL容量瓶中并用水定 容至刻度线，摇匀。 4.6 标准储备溶液：准确称取适量标准品 (精确至 0.0001 g)，用甲醇定容至刻度，并摇匀，配制成浓度为 1 mg/mL的标准储备溶液， -18 ℃冷冻避光保存 ，有效期为 3个月。 4.7 标准中间溶液：准确移取 100 μL标准储备溶液于 10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，并摇匀， 配制成浓度为 10 μg/mL的标准中间溶液， 4 ℃冷藏避光保存，有效期为 1个月。 4.8标准工作溶液：根据需要用初始 流动相把中间标准溶液稀释成适合浓度的混合标准工作溶液，现用 现配。 4.9 聚苯乙烯 -二乙烯基苯 -N-吡咯烷酮固相萃取柱 (HLB固相萃取柱 )：200 mg、6 mL(60 μm)，(使用前分 别使用 6 mL甲醇和 6 mL水进行活化 )。 5 主要仪器和设备 5.1 超高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾 (ESI)离子源。 5.2 研磨机。 5.3 氮吹仪。 5.4 涡旋混合仪。 5.5 电子天平：感量 0.001 g和0.0001 g。 全国团体标准信息平台 T/AHFS 005-2024 2 5.6 离心机。 5.7 超声波提取仪。 6 分析步骤 6.1 试样的制备与贮藏 液体试样和粉状固体试样应分别混合均匀，半固体试样取固液共存物进行匀浆混合，固体试样经 电动搅拌器粉碎等方式混合均匀，密封，制备好的试样在 -18 ℃以下避光保存，备用。 6.2 试样处理 6.2.1提取 准确称取 2 g均质后的样品 (精确至 0.0001 g)于50 mL离心管中，加入 10 mL石油醚 (4.3)，涡旋 3 min，11180 g离心 10 min，弃去上清液，加入 20 mL盐酸水溶液 (4.6)涡旋混匀后，在沸水浴中加热 30 min，每隔 5 min振摇一下。加热完成后取出冷却至室温，涡旋混匀 5 min，超声提取 10 min，11180 g 离心 10 min，将上清液移入 100 mL容量瓶中。再加入 20 mL盐酸水溶液 (4.6)至上述离心后的固体试 样中，涡旋混匀 5 min，超声提取 10 min，11180 g离心 10 min，将上清液合并到上述 100 mL容量瓶 中，用水定容至刻度，摇匀。 6.2.2净化 准确移取 10 mL提取液，至 HLB固相萃取柱中，再用 12 mL水淋洗，最后用 9 mL甲醇 (4.2)洗 脱，收集洗脱液。洗脱液在 40 ℃水浴中氮气吹干，使用 1.0 mL，2%甲酸水溶液 -甲醇 (1+1，v/v)进行 复溶，复溶液经过 11180 g离心 5 min后，取上清液，供 UPLC -MS/MS上机测定。 6.3 混合基质标准溶液的制备 称取 5份2 g试样 (精确至 0.001 g)于50 mL离心管中，分别加入 5 ng、10 ng、50 ng、100 ng和200 ng中间标准溶液或标准工作溶液，余下操作同 6.2。 6.4 测定 6.4.1液相色谱条件 色谱柱： C18柱， 150 mm× 3.0 mm(内径 )，粒度 3 μm，或性能相当； 柱箱温度： 35 ℃； 流动相： A- 0.3%甲酸水溶液， B-甲醇溶液； 流速： 0.5 mL/min； 进样体积： 10 μL； 流动相梯度洗脱程序见表 1 全国团体标准信息平台